[发明专利]内生枯草芽孢杆菌抗菌脂肽及分离纯化方法无效
| 申请号： | 200910031749.1 | 申请日： | 2009-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN101724014A | 公开（公告）日： | 2010-06-09 |
| 发明（设计）人： | 林玲;孙义;乔勇升;张昕;周益军 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C07K4/04 | 分类号： | C07K4/04;C12P21/02;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/16;A01P3/00;C12R1/125 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210014 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 枯草 芽孢 杆菌 抗菌 分离 纯化 方法 | ||
1.一组枯草芽孢杆菌胞外抗菌脂肽，其特征在于：从保藏号为CGMCC No.1564的内生 枯草芽孢杆菌Jaas ed1胞外产物中分离纯化后获得，所用分离纯化方法为：
a、将保藏号为CGMCC No.1564的内生枯草芽孢杆菌Jaas ed1转接到NB培养液中，在 30℃、120r/min条件下振荡培养48h，4℃、10000r/min、离心10min，除去菌体， 收集上清液，再一边用磁棒搅拌，一边将硫酸铵固体分批加入，使得硫酸铵饱和度在 45-55％之间，4℃静置过夜后，10000r/min离心18min，得到的沉淀溶解于pH为 7.0的0.05mol/L磷酸缓冲液中，即为抗菌脂肽粗提物；
b、将粗提物上样于Sephedex G-25分子筛层析柱，用pH为7.0的0.05mol/L磷酸缓冲 液洗脱，流速1ml/min，在紫外光OD 280nm处检测，有I、II两个吸收峰，其中峰 I具有抑菌活性；
c、将峰I收集液浓缩上样于Cellulose DEAE-52阴离子交换柱，分别用含0mol/L、 0.1mol/L、0.4mol/L、1.0mol/L NaCl的pH为7.0的0.05mol/L磷酸缓冲液进行梯度洗 脱，流速为1ml/min，在紫外光OD 280nm处检测，分别在0.1mol/L、0.4mol/L、1.0 mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗脱浓度下各出现吸收峰，其中在0.4mol/L NaCl的磷酸缓 冲液洗脱下来的峰物质具有抑菌活性；
d、再将在0.4mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗脱下来的峰物质收集液浓缩上样于 FPLC300SB-C18反相半制备柱，采用梯度洗脱：0-15min 5％乙腈，15-45min 40％乙 腈，45-75min 80％乙腈，75-90min 95％乙腈，流速1.5ml/min，在紫外光OD 280nm 处检测，其中34-37min的收集液具有抑菌活性，经浓缩后用Tricine-SDS-PAGE检测， 已经达到电泳纯，即只有1个条带；34-37min的收集液即为纯化获得的保藏号为 CGMCC No.1564的内生枯草芽孢杆菌Jaas ed1的胞外抗菌脂肽。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江苏省农业科学院，未经江苏省农业科学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200910031749.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
