[发明专利]D-半胱氨酸酶法转化制备方法有效
| 申请号： | 200910032018.9 | 申请日： | 2009-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN101591693A | 公开（公告）日： | 2009-12-02 |
| 发明（设计）人： | 焦庆才;赵根海;刘均忠;张飞;刘茜;董凯 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12P41/00 | 分类号： | C12P41/00;C12P13/12;C12P13/22 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 | 代理人： | 胡锡瑜 |
| 地址： | 210097*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 半胱氨酸 转化 制备 方法 | ||
1.一种D-半胱氨酸酶法转化制备方法，其特征是由以下步骤构成：
(1)具有高活力L-色氨酸酶的基因工程菌WW-4，在含有IPTG或乳糖的培 养基中培养，产生高活力的L-色氨酸酶；
(2)用游离细胞法，将含酶细胞或酶提取液与缓冲液配制的含有DL-半胱氨 酸的混合氨基酸或DL-半胱氨酸盐酸盐的转化液混合，再加入适量的吲哚、 表面活性剂和磷酸吡哆醛，在30～45℃条件下进行酶促反应，将反应生成物 进行分离，得到高纯度的D-半胱氨酸，同时还得到L-色氨酸。
2.根据权利要求1所述D-半胱氨酸酶法转化制备方法，其特征在于步骤(2) 所述的含有DL-半胱氨酸的混合氨基酸转化液来源于经过分离提取的动物角 蛋白酸水解液，其中DL-半胱氨酸在总氨基酸中含量(w/w)为10％～90％。
3.根据权利要求1所述D-半胱氨酸酶法转化制备方法，其特征在于步骤(2) 所述的DL-半胱氨酸盐酸盐浓度为10g/L～500g/L，缓冲液包括磷酸缓冲液、 醋酸缓冲液、硼酸缓冲液或碳酸缓冲液，使转化液pH7.5～9.5。
4.根据权利要求1所述的D-半胱氨酸酶法转化制备方法，其特征在于步骤(2) 所述的表面活性剂包括吐温-80、十六烷基三甲基溴化铵和聚乙二醇辛基苯基 醚，其浓度为0.005g/L～5.0g/L。
5.根据权利要求1所述的D-半胱氨酸酶法转化制备方法，其特征在于步骤(2) 分离D-半胱氨酸和L-色氨酸的方法为等电点结晶法或等电点结晶与离子交 换树脂分离相结合的方法。
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