[发明专利]17-AAG在制备眼部RPE细胞VEGF抑制剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于眼科学及基因工程领域，涉及17-AAG在制备眼部RPE细胞VEGF抑制剂中的应用。

背景技术

17-AAG(17-丙烯胺基，17-去甲氧基格尔德霉素)作为一种新的热休克蛋白90抑制剂，体内、体外实验已经证明其有很强的抗肿瘤作用，而且毒性较小^[1]。最近已经进入临床II/III期实验。17-AAG不仅可以抑制肿瘤细胞增殖，也可以抑制供应肿瘤的血管形成^[2]。17-AAG抑制新生血管的机制已经有了一定的研究，初步研究发现其不仅可以抑制VEGF(血管内皮生长因子)，还可以抑制多种与新生血管相关的分子，如Akt，HIF-1α(低氧诱导因子-1α)等^[3]-[4]。

VEGF是目前已知在脉络膜新生血管(choroidal noevascularization，CNV)生成的微环境中最重要的促血管生成因子之一，大量研究证实，VEGF在AMD、糖尿病视网膜病变、视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变等病理性新生血管形成过程中起着关键的作用^[5]。VEGF既能破坏正常眼的血-视网膜屏障，造成视网膜的渗出、出血和水肿，也能诱导血管内皮细胞的分裂、增生，并促使内皮细胞迁移，增强了毛细血管通透性，使血浆外渗，有利于新生血管以出芽的方式促成大量血管形成，还可以使非内皮细胞分泌VEGF，再通过旁分泌机制作用于其他细胞。此外，VEGF还可增加视网膜血管内皮细胞间黏附分子的蛋白质水平，促进白细胞瘀滞，破坏血管壁，激活血小板，引起血流缓慢和血栓形成，导致局部视网膜缺血缺氧，最终形成新生血管^[6]-[7]。灵长类及转基因动物实验中也已证实其促CNV发生的作用。用可溶性VEGFR1或VEGF抗体抑制VEGF可减少CNV的形成和发展。因此，针对VEGF的药物治疗成为当前新生血管研究的重点^[8]。虽然Avastin等抗VEGF的一类药物给视网膜和脉络膜新生血管的治疗带来了希望，也取得了一定的治疗效果，但这类药物作用位点单一，治疗效果有限，有一定的并发症。所以抑制视网膜和脉络膜新生血管的药物仍在不断的研发中。

发明内容

本发明的目的是提供17-AAG在制备眼部RPE细胞VEGF抑制剂中的应用以及17-AAG在制备眼部RPE细胞VEGF受体抑制剂中的应用，本发明还提供17-AAG在制备脉络膜新生血管抑制剂中的应用。

本发明的技术方案是：发明人发现17-AAG对RPE细胞中的VEGF及其受体有抑制作用，尤其对VEGFA的抑制作用较强。具体情况为低浓度的17-AAG只能抑制RPE细胞中的VEGFA，随着17-AAG浓度的增加，VEGFB和VEGFR1的表达水平也下调，呈剂量依赖型。其中VEGFA下调较明显，而VEGFR2只有在高浓度17-AAG时才能被抑制，这些结果说明，17-AAG对于脉络膜新生新生血管疾病的治疗很有价值。故提出17-AAG在制备眼部RPE细胞VEGF抑制剂中的应用、17-AAG在制备眼部RPE细胞VEGF受体抑制剂中的应用以及17-AAG在制备脉络膜新生血管抑剂中的应用。

本发明的有益效果：1、现有技术虽然公开了17-AAG可抑制VEGF及其受体，但研究的是其它组织或器官中的VEGF及其受体，本发明通过研究首次发现了17-AAG对眼部RPE细胞VEGF及其受体具有抑制作用。2、17-AAG与现有的抗VEGF的药物在治疗眼病方面相比优点是作用靶点不仅局限在VEGF和VEGFR，17-AAG对新生血管相关因子Akt也有明显的抑制作用。

附图说明

图1RT-PCR反应后琼脂糖凝胶电泳结果。

图2熔解曲线分析。

A图为VEGFA基因的熔解曲线，B为VEGFB基因的熔解曲线，C为VEGFR1基因的熔解曲线，D为VEGFR2基因的熔解曲线，E为AKT基因的熔解曲线，F为Actin基因的熔解曲线

图317-AAG对VEGF、VEGF受体及Akt的作用。

A：17-AAG浓度对VEGF、VEGF受体及Akt的作用

B：17-AAG作用时间对VEGF、VEGF受体及Akt的作用

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。

实施例l给药组和对照组细胞制备