[发明专利]一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法

权利要求书

1.一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法，包括如下几个步骤：

第一步；对充分暴露的蚯蚓体进行清肠，清洗；

第二步：自由基的PBN捕获；

第二步：EPR测定。

2.根据权利要求1所述的一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法，其特征在于：

在第二步自由基捕获前半个小时，在密闭操作箱中导入氮气以彻底去除氧气，以防产生甲氧基对结果进行干扰。

3.根据权利要求2所述的一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法，其特征在于第三步具体为：清肠后的蚯蚓取出放入冰生理盐水反复清洗，用滤纸吸干体表水分，迅速称量0.1g蚯蚓置于玻璃匀浆器内，加入1mL二甲基亚砜为溶剂配制的浓度为50mmol/L的PBN溶液，冰浴条件下匀浆后，静置3-5min，待组织匀浆液出现有机相与水相的两相分层后，取上层液400μL注入直径为3mm石英管中，迅速放入液氮中保存，准备进行EPR测定；以上整个操作过程在以导入氮气与氧气隔绝的密闭操作箱中进行。整个过程应避免水分沾入。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的一种测定蚯蚓体内羟基自由基的方法，其特征在于：EPR测定使用Bruker公司的EMX 10/12型电子顺磁共振仪，EPR操作参数：测试温度(TE)室温，微波功率(SP)20mW，微波频率(SF)9.751GHz，调制频率(MF)100KHz，调制幅度(MA)0.5G，中心磁场(CF)3470G，扫场时间(TI)84s，时间常数(TC)41ms，扫场宽度(SW)200G，信号为5次叠加。