[发明专利]防除连作棉花黄萎病的拮抗菌及用其微生物有机肥料

权利要求书

1.用于防除连作棉花黄萎病的拮抗菌，包括菌株NJHJ-5和菌株NJDF-14，其中，

菌株NJHJ-5属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，2009年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3301，主要生物学特性为：革兰氏染色阳性G⁺，细胞形状为杆状，芽孢中生或近中生，椭圆形，孢囊不膨大，没有伴孢晶体；接触酶阳性，氧化酶阳性，甲基红试验阳性，硝酸还原酶阳性，淀粉水解阳性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，能够利用葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露醇等多种碳源生长，最适生长温度37℃，最适pH为7.2；在LB培养基上菌落为圆形，边缘不规则，白色，不产生色素，菌落中间褶皱突起；

菌株NJDF-14属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，2009年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.3302，主要生物学特性为：革兰氏染色阳性G⁺，细胞形状为杆状，芽孢中生或近中生，椭圆形，孢囊不膨大，没有伴孢晶体；接触酶阳性，氧化酶阳性，甲基红试验阳性，硝酸还原酶阳性，淀粉水解阳性，明胶水解阳性，分解酪蛋白阳性，能够利用葡萄糖、蔗糖、果糖、甘露醇等多种碳源生长，最适生长温度37℃，最适pH为7.2；在LB培养基上菌落为圆形，边缘不规则，白色，不产生色素，菌落中间平滑无褶皱突起。

2.用权利要求1所述用于防除连作棉花黄萎病的拮抗菌所生产的微生物有机肥料。

3.根据权利要求2所述的防除连作棉花黄萎病的微生物有机肥料，其特征在于：该肥料中分别含有1×10⁹个/g以上的拮抗菌NJHJ-5和NJDF-14、全氮质量比含量为4～5％，全氮中质量比90％以上为有机氮，总氮磷钾养分质量比为6～10％、有机质质量比含量为30～35％。

4.权利要求2或3所述防除连作棉花黄萎病微生物有机肥料的生产方法，包括：

1)将权利要求1所述的菌株NJHJ-5和菌株NJDF-14分别接种到改良的PDA培养液，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH范围为7.0-7.2，培养温度30-38℃，搅拌速度为170转/分钟，发酵中后期形成芽孢，发酵的拮抗菌液含菌或芽孢量≥5×10⁹个/ml；所用的改良PDA培养液配制方法为，以配制1L培养基为例：用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30min，经过滤后滤液中加20g淀粉，定容至1000ml，pH值调至7.2-7.4，121℃灭菌20min；

2)有机肥的制备：以腐熟的猪粪堆肥和菜粕的微生物酶解混合物以体积比1∶1混合制成；其中菜粕的微生物酶解混合物制备方法为，将ZL200610086126.0中公开的保藏号为CGMCC NO.1543的嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)菌株37-1发酵液加入到菜粕原料中，调节含水量55-65％和pH6.0-7.5，进行开放式固体发酵，待发酵温度上升至50℃时立即开始翻堆，以后每天翻堆，使堆温始终维持在35-50℃共5天，固体发酵开始后，堆物的pH会不断上升，每次翻堆时用含酸液体调节含水量和pH，使它们分别维持在55-65％和6.0-7.0，发酵终止时再用含酸液体进行喷洒，直至堆物pH调整为5.0左右，再进行低温干燥或自然凉干，即为菜粕的微生物分解混合物；

3)将NJHJ-5和NJDF-14液体菌剂按50L/吨的量分别接种到步骤2)所述有机肥中进行固体发酵，发酵温度为30-50℃，发酵过程中每天翻堆1次，发酵5-7天后结束，使拮抗菌含量达到1×10⁹个/g以上，分别获得拮抗菌NJHJ-5和NJDF-14的固体菌剂；

4)分别将拮抗菌NJHJ-5固体菌剂和NJDF-14固体菌剂以体积比1∶1混合，并后熟2-3天，后熟过程中翻堆2次，最后在温度不超过60℃的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至30％以下，包装出厂即为防除连作棉花黄萎病的微生物有机肥料。

5.根据权利要求4所述微生物有机肥料的生产方法，所用腐熟的猪粪堆肥发芽指数为98％以上，有机质质量比含量≥35％，有机氮质量比含量为1.2-2％，含水量25-30％。

6.权利要求2或3所述微生物有机肥料在防除连作棉花黄萎病中的应用。