[发明专利]美人鱼发光杆菌疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及鱼类疾病防治领域，具体涉及一种美人鱼发光杆菌疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae subsp.damselae)是一种革兰氏阴性，可以发光的，嗜盐条件性致病菌，它最初是1981年，从在温暖海水中生长的鲱鱼的溃疡伤口中分离到的，并分类到弧菌属，称为美人鱼弧菌，广泛分布于海洋、近海岸及海水生物中。它能引起的人畜病症与弧菌属相似，均能引起人类肠胃炎、伤口感染和人畜败血病(CURRENT MICROBIOLOGY Vo1.48(2004)，pp.167-174Cloning and Characterization of the Gene Encoding forOMP-PD Porin：The Major Photobacterium damsela Outer Membrane Protein)。

美人鱼发光杆菌是一种具极端破坏性的引起组织坏死传染病的细菌，国外许多学者称之为“人鱼共患病原菌”，它不仅会引起假结核病和鱼出血性败血症，导致渔产养殖损失50％以上，还能通过人的伤口或者是食用未熟海产品而使人致病，如它能导致健康人类的伤口感染，原发性败血症，甚至还能引起致命坏死性筋膜炎等，在日本就发生过多起渔民感染了美人鱼发光杆菌而严重致病的事件。更可怕的是，越来越多的报道表明美人鱼发光杆菌具有强致死性，能同时以有免疫缺陷或者是健康人为宿主，并诱发快速的，爆发性的传染(Fraser SL，Purcell BK，Delgado B Jr，Baker AE，Whelen AC.Rapidly fatal infection due to Photobacterium(Vibrio)damela.Clin Infect Dis 1997；25：935-936.)。

目前的研究证实美人鱼发光杆菌的致病因子有细胞外溶血素、美人鱼细胞溶解素、外膜蛋白和神经氨酸酶等。有学者对中国某海域海水进行了细菌普调查，美人鱼发光杆菌检出率高居第三位，占6.9％，为海洋优势菌，并对此进行了毒力实验及伤口感染实验，结果表明其具有组织侵入力，同时对动物还有较强的感染力。作为致病菌，其可引起卵形鲳鲹、小热带鱼、浅海鳖鱼、金头鲷、尖吻鲈、大菱鲆、鳗鲡等多种海水鱼类的创伤感染、出血性败血病，甚至死亡，带来巨大的经济损失。

虽然传统的抗生素在治疗和防治海水鱼类细菌性疾病中发挥了重要作用，但长期用抗生素会引起细菌的耐药性，使用药的剂量越来越大，药物残留严重，影响水产品的质量，甚至威胁人类的健康。可见研制疫苗十分有必要。

现在针对细菌的大多是采用灭活全菌苗，但灭活全菌苗在制备过程中常常会产生复杂的微生物代谢产物，从而出现副作用，使得免疫效果并不理想。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种能够有效的预防美人鱼发光杆菌致病，且使用安全、免疫保护效果明显的美人鱼发光杆菌疫苗。

本发明的另一个目的在于提供一种制备上述美人鱼发光杆菌疫苗的方法，该制备方法操作简单，成本低廉。

本发明的另一个目的在于提供上述美人鱼发光杆菌疫苗在制备防治鱼类尤其是海水鱼类疾病的药物中的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

本发明针对美人鱼发光杆菌的保护性抗原进行探索，通过比较发现此菌外膜的脂多糖(LPS)具有较好的保护性抗原特性，可以制成疫苗来抵抗美人鱼发光杆菌的侵袭。

一种美人鱼发光杆菌疫苗，该疫苗是将美人鱼发光杆菌脂多糖与佐剂混合后制备而得。所述佐剂可以选择任何一种制备疫苗常用的，如弗氏不完全佐剂、弗氏完全佐剂及氢氧化铝佐剂等。

上述美人鱼发光杆菌疫苗中，每1ml疫苗含有美人鱼发光杆菌脂多糖0.25～1mg，优选每1ml疫苗含有美人鱼发光杆菌脂多糖0.5mg。

上述美人鱼发光杆菌疫苗中，佐剂的用量并不用做特别限定，实际操作时可选择疫苗中美人鱼发光杆菌脂多糖与佐剂的质量比为2∶3～3∶2，优选两者质量比为1∶1。

本发明美人鱼发光杆菌疫苗的制备方法，是先培养美人鱼发光杆菌并且将其灭活后，从已灭活的菌体中提取美人鱼发光杆菌脂多糖，然后将该脂多糖与佐剂混合得到美人鱼发光杆菌疫苗。

上述制备方法中，美人鱼发光杆菌的培养采用斜面培养、液体培养等常规培养方法。

上述制备方法中，美人鱼发光杆菌的灭活也采用本领域的常规方法，如可用福尔马林灭活、甲醛等。