[发明专利]分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法无效
| 申请号： | 200910037626.9 | 申请日： | 2009-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN101824425A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 夏坤;佟顺刚 | 申请（专利权）人： | 广州天宝颂原生物科技开发有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 广州市南锋专利事务所有限公司 44228 | 代理人： | 刘媖 |
| 地址： | 510663 广东省广州市科学*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 分子 设计 亲和 标记 结合 尿胆素 藻红蓝 蛋白 亚基类 荧光 蛋白质 制备 方法 | ||
1.一种分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)采用基因工程方法，将α亚基裂合酶基因或其同源基因克隆于表达载体中，得到α亚基裂合/异构酶表达质粒；应用基因工程方法将链霉亲和素基因和藻红蓝蛋白α亚基类脱辅基蛋白基因或其同源基因克隆于第二个表达载体中，得到链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒；应用基因工程方法将藻红胆素PEB生物合成酶基因或其同源基因克隆于第三个和/或第四个表达载体中，得到PEB合成质粒；
(2)将α裂合/异构酶表达质粒、链霉亲和素标记的脱辅基蛋白表达质粒、PEB生物合成酶质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程能生产链霉亲和素标记的结合藻尿胆素PUB的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质，发酵后，按常规蛋白质提纯技术，可提纯得到相应的链霉亲和素标记的结合藻尿胆素PUB的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质。
2.根据权利要求1所述分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于：应用α亚基裂合/异构酶催化藻红色素异构为藻尿胆素后与链霉亲和素标记的藻红蓝蛋白α亚基类脱辅基蛋白进行共价结合而制备链霉亲和素标记的结合PUB的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质。
3.根据权利要求1和2所述的分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于：α亚基裂合/异构酶基因是指与鱼腥藻Anabaenasp.PCC7120中pecE和pecF基因或层理鞭枝藻M.laminosus sp.PCC7603中pecE和pecF基因同源的基因，藻红蓝蛋白α亚基类脱辅基蛋白基因是指与Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中pecA同源的基因。
4.根据权利要求1和2所述的分子设计链霉亲和素标记的结合藻尿胆素的藻红蓝蛋白α亚基类荧光蛋白质的制备方法，其特征在于：所述的宿主菌采用大肠杆菌。
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