[发明专利]一种铅绿褶菇子实体的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种草腐生菌的人工培养方法，具体来说是一种铅绿褶菇子实体的生产方法。

背景技术

铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)又称大青褶伞或铅环柄菇，在分类上隶属于担子菌亚门(Basidiomycotina)层菌纲(Hymenomycetes)伞菌目(Agaricales)蘑菇科(Agaricaceae)。铅绿褶菇是一种草腐生菌，在广东省、台湾地区等热带省份均有分布，这种毒菇雨后长在草坪、蕉林地上，易与食用菌高大环柄菇(Macrolepiotaprocera(Scop.)Singer)等菌类混淆，误食了铅绿褶菇会引起胃肠型中毒症状，食量大时还会致命。然而这些毒蘑菇的毒素通常都具有研究价值，例如鹅膏菌(Amanita)的肽类毒素就可用作科研实验的生化试剂。据研究，铅绿褶菇的毒素主要是水溶性的生物碱。蘑菇毒素研究的最佳生物材料是其子实体。但是铅绿褶菇的野生子实体资源十分有限，并且受季节气候的制约。而用发酵培养得到的菌丝体不一定含有毒素或者毒素含量太低，根本不能满足科学研究的需要。

发明内容

本发明的目的在于开发出一种高效的铅绿褶菇子实体的生产方法。

通过将野生或人工培养的铅绿褶菇子实体在PDA斜面培养基上培养得到斜面母种，然后接种到液体培养基中培养得到液体菌种，再经过麦粒培养基培养得到白色生产种，将生产种播种到生产用培养基，然后再进行覆土，每1kg生产用培养料可得到300～800g新鲜的铅绿褶菇子实体，从而实现了本发明的目的。

本发明的铅绿褶菇子实体的生产方法，其特征包括以下的步骤：

(1)将铅绿褶菇(Chlorophyllum molybdites(Meyer.：Fr.)Massee)子实体组织分离或多孢分离，然后接种至斜面综合PDA培养基，23～30℃下培养，至菌丝长满斜面，再以此作菌种按50～150g/L接种量扩大培养，得到能用于生产的铅绿褶菇母种；所述的综合PDA培养基的pH是6～7，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯75～85份，葡萄糖6～10份，琼脂6～10份，磷酸二氢钾0.2～1.5份，硫酸镁0.2～1.5份和VB₁ 0.002～0.006份，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量3.5～4.5倍的水，煮沸20～30分钟至马铃薯熟而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补至原加水量后，加入琼脂熔化，再加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB₁搅拌均匀，趁热装于试管灭菌后，冷却到45～50℃倒成斜面作接种用；

(2)将步骤(1)得到的铅绿褶菇母种按50～150g/L的接种量接种至液体培养基里，于温度为22～30℃、摇速为110～150转/分钟、培养时间为7～12天，得到的菌液褐色，菌球黄豆大小，即为液体菌种，所述的液体培养基的pH为6～8，其原料组成按质量份计，为已去皮去芽眼的马铃薯88～91份，葡萄糖8.2～9.0份，KH₂PO₄ 1.2～1.5份，MgSO₄ 0.6～0.75份和VB₁ 0.004～0.006份，并通过下述方法制得：原料按所述组成分别称重后，先将马铃薯切成小条放入锅中，加入原料组成总质量4.3～4.5倍的水，煮沸20～30分钟左右至马铃薯熟而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤汁于锅中，补水至原加水量后，加入葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁和VB₁，搅拌均匀，趁热灭菌，冷却后作接种用；

(3)将步骤(2)得到的液体菌种按50～180mL/kg的接种量接种至麦粒培养基里，20～30℃培养30～45天，菌丝长满培养基，正常菌丝呈白色，即得到生产用的麦粒菌种，所述的麦粒培养基为pH11～12，按其原料组成总质量分数100％计，为小麦30％～50％，棉子壳30％～50％，麸皮10％～20％，碳酸钙0.5％～1.2％，石膏0.5％～1.2％，磷酸二氢钾0.3％～1％和石灰0.5～1.2％，并由下述方法得到：原料按所述组成分别称重后，先把小麦浸泡20～30小时，再用自来水冲洗干净，用锅煮熟20～38分钟，过滤滴干拌入其它组份混合拌均，此时含水量为50％～60％，装入培养瓶里灭菌，冷却后作接种用；