[发明专利]长翼蝠瘦素蛋白及其cDNA序列

说明书

技术领域

本发明涉及瘦素蛋白，具体涉及一种来源于长翼蝠的瘦素蛋白及其cDNA序列。

背景技术

瘦素蛋白(leptin)是1994年发现的一个由167个氨基酸组成的小蛋白，由脂肪组织分泌的蛋白质类激素，目前研究结果已经证实其它组织也能产生，包括胎盘、大鼠的骨胳肌、大鼠的胃、人的乳腺上皮细胞、人和鼠的腺垂体等。

瘦素蛋白是肥胖相关的信号，脂肪组织的反馈信号作用到脑中心，控制饮食行为和活动(代谢和运动)，是ob(obese)基因的产物。脂肪组织产生的瘦素蛋白经血液运输到脑，与下丘脑的受体作用后通过控制饮食摄入和能量消耗来控制哺乳动物的体重，被认为是最具有潜力的减肥药物之一。

瘦素蛋白除了能够降低食欲，控制体重，减少体内脂肪含量外，还可传递动物体内外能量贮存信号到大脑中枢，影响神经内分泌系统，促进动物生殖系统发育和获得生育能力，调控动物初情期的启动、性成熟和妊娠等生殖活动，调节胎儿胎盘，使动物提前发情，缩短发情周期，调节葡萄糖代谢，脂类代谢，调节血压、大脑和骨骼发育，伤口愈合，细胞分化增殖，参与造血作用，机体免疫调节等功能。瘦素功能的多样性尤其在能量调节方面的关键作用，也赋予瘦素更大的产品开发的价值。

瘦素蛋白的开发和利用已深入到许多领域包括减肥药物的开发以及减肥产品的深加工，治疗糖尿病药物开发，治疗高血压药物开发，治疗脂肪肝药物开发等等，随着对其功能认识的不断深入，关于leptin产业化前景将更加广阔。

发明内容

本发明的目的在于提供一种来源于长翼蝠(Miniopterus fuliginosus)的瘦素蛋白，为今后开发瘦素基因工程产品奠定物质基础。

本发明的另一个目的在于提供含有上述瘦素蛋白完整编码区的cDNA序列。

本发明的上述目的通过如下方案予以实现：

本发明提供一种瘦素蛋白，该瘦素蛋白为如下(i)或(ii)所述任一项的蛋白质：

(i)一种具有SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的蛋白质；

(ii)在氨基酸序列(i)中，由缺失、取代或加成1个或几个氨基酸的氨基酸序列所组成，且与氨基酸序列(i)的蛋白质具有相同功能的蛋白质。

本发明的瘦素蛋白优选具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。

本发明还提供编码上述瘦素蛋白的cDNA序列，该cDNA序列为编码如下(i)或(ii)所述任一项蛋白质的cDNA序列：

(i)一种具有SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的蛋白质；

(ii)在氨基酸序列(i)中，由缺失、取代或加成1个或几个氨基酸的氨基酸序列所组成，且与氨基酸序列(i)的蛋白质具有相同功能的蛋白质。

上述编码瘦素蛋白的cDNA序列优选其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明的瘦素蛋白来自于长翼蝠(Miniopterus fuliginosus)，提取长翼蝠脂肪组织总RNA反转录后作为模板，根据已知哺乳动物瘦素蛋白序列保守区设计简并引物进行简并PCR扩增，测序后得到本发明瘦素蛋白的全长cDNA序列，并对该全长cDNA序列进行氨基酸分析，得到本发明长翼蝠瘦素蛋白为SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列，总共167个氨基酸，其中前21个氨基酸为信号肽序列。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

1.本发明从长翼蝠的脂肪组织中获得了一种瘦素蛋白的全长cDNA，并进行了蛋白表达，通过利用GST重组表达技术和凝血酶酶切除去GST标记物，成功获得了长翼蝠瘦素蛋白，此外对该蛋白进行细胞活性分析，结果表明本发明的长翼蝠瘦素蛋白具有明显的脂肪降解活性，可用于制备减肥药物、治疗糖尿病药物、治疗高血压药物以及治疗脂肪肝药物等；

2.本发明的瘦素蛋白是来源于长翼蝠的，而长翼蝠是一种冬眠动物，冬眠动物较之其他动物能更加好的增加体内能量使用率，使其燃烧更多脂肪，从而使体内脂肪控制在一定量，因此来源于冬眠动物长翼蝠的瘦素蛋白也具有更加好的脂肪降解能力。

附图说明

图1为长翼蝠瘦素蛋白全长cDNA序列的PCR扩增电泳图；

其中，1为分子量标记，2为PCR扩增产物；

图2为实施例2中重组质粒表达产物的SDS-PAGE检测电泳图；

其中，1为重组表达菌未诱导对照样品，2为重组表达菌IPTG诱导3h后样品，3为分子量标记，箭头所指处为新的表达条带；

图3为实施例3中蛋白表达的SDS-PAGE检测电泳图；