[发明专利]用于检测甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸纳米金生物传感器

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种用于甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒核酸快速检测方法及检测产品。

背景技术

流行性感冒简称流感，是由甲型、乙型、丙型三种流感病毒引起的急性呼吸道传染病。其中，甲型流感病毒的宿主最广、危害最大，人、禽、畜都是甲型流感病毒的宿主。根据其表面结构(血凝素H和神经氨酸酶N)及其基因特性的不同，甲型流感病毒又可分成许多亚型，至今甲型流感病毒已发现的血凝素有16个亚型(H1-H16)，神经氨酸酶有9个亚型(N1-N9)。

2009年从墨西哥爆发并蔓延到全球多个国家的人感染甲型H1N1流感疫情，是由于一种新变异的甲型H1N1流感病毒引发的，被世界卫生组织称为“国际关注的突发公共卫生事件”，已达到了最高的6级警告标准。

今年流行的甲型H1N1流感是甲型流感病毒中的一个亚型，已经蔓延到世界许多国家，不足一个月，全球确诊的甲型H1N1流感病例已突破万例，我国也出现了多例输入性流感病例。给人类生命安全造成了一定危害，包括我国政府在内的世界各国都采取了积极有效的防控措施，以防止疾病的迅速蔓延。面对突然爆发的流行性疾病，开展对疾病预防、诊断、致病机理以及治疗研究是相关领域关注和研究的重点。

甲型流感病毒是RNA病毒，传统的基因检测技术有Northern杂交、Southern杂交、Western blotting、PCR等，这些检测方法不仅费时费力，而且特异性差。在过去的十几年中，实时荧光定量PCR已经发展成为一种重要的基因检测技术，具有高灵敏度和特异性，但是需要昂贵的仪器及专业人员的操作。近年来兴起的DNA纳米技术是以DNA碱基严格互补配对的特性为原理，主要应用于分子的组装，产生有功能的组装聚集物。DNA纳米技术包括基因芯片之外，还有一种是将DNA结合到纳米颗粒上构成纳米颗粒基因探针，通过与靶DNA之间的互补实现纳米颗粒的组装，这已成为一种新型的DNA检测系统。Mirkin等运用金纳米颗粒基因探针与合成靶杂交，形成透射电镜下明显的聚集体，可判断合成靶存在与否(Chad A.Mirkin，R.L.L.，Robert C.Mucic&JamesJ.Storhoff Nature 1996，382，607-609)。Wang等制备金纳米颗粒乙型肝炎病毒(HBV)DNA基因探针，在玻片上目视化检测HBV DNA的多聚酶链反应产物(Wang YF，Pang DW，Zhang ZL，et al.Visual gene diagnosis of HBV and HCVbased on nanoparticle p robe amp lification and silver staining enhancement.J MedVirol，2003，70：2052211)。习东等应用Fe3O4(核)/Au(壳)纳米颗粒HBV DNA基因探针，通过尼龙膜上斑点杂交或液相中杂交研究其在检测HBV DNA中的应用(Dong Xia，X.L.，Qin Ninga，Qianghua Lud，Kailun Yao，Zuli Liud Journalof Nanjing Medical University 2007，21，207-212)。但上述检测技术都存在各自的缺点，如Mirkin的技术需要复杂昂贵的透射电镜，Wang需要昂贵的进口玻片，且需要长时间的预杂交、杂交洗涤过程，习东的检测时需要长时间的复杂的预杂交、杂交、洗膜银染过程，没有技术优点耗时费力，且都处于试验研究阶段，没有产品化。所以仍然需要寻找快速、灵敏、低成本、操作简易的核酸检测工具。为配合这一研究，研究了能迅速准确检测甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒的核酸纳米金生物传感器的检测方法及开发了其试剂盒，对于早期大规模筛查及有效地控制疾病的迅速传播具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是克服现有甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒检测技术及产品存在的问题和不足，提供一种用于快速检测甲型流感病毒及甲型H1N1流感病毒(2009年流行的新变种)的核酸纳米金生物传感器。