[发明专利]一种育珠免疫增强剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于一种免疫增强剂的制备方法。

背景技术

自古至今，珍珠一直被认为是一种最珍贵和最有价值的物品，是富贵和权利的象征。她可以作为装饰品，让人佩带起来显得高贵、纯洁和典雅；她具有神奇的药用功效，据药典记载：珍珠性寒无毒，有镇心润颜、止渴坠痰、点目去膜、催下死胎，可治小儿惊风、腹泻、创伤、抽搐和心悸等，在中药上的应用比较广泛；此外，珍珠也是美容保健佳品，她含有十多种人体必需氨基酸和二十多种微量元素，还含有特殊的抗衰老因子-卟啉类化合物，其美容功效十分显著。

目前用于培育海水珍珠的珍珠母贝，主要是马氏珠母贝(又名合浦珠母贝、马氏珍珠贝)、大珠母贝(又称白蝶贝)、珠母贝(又称黑蝶贝)以及企鹅珍珠贝)，我国海水珍珠业经过40多年的发展，已形成产业化、规模化生产，年产量已达30t，产量占据了世界的95％以上，已超过日本的产量，在国际市场上占有重要地位，但在发展的过程中也暴露出一些问题[3]。比如海水珍珠养殖缺乏全面科学规划，造成休养贝死亡率高、吐核率高，育珠贝存活率低、留核率低、商品珠比率低的现象，造成了母贝资源和入力资源的浪费。

目前，药物处理细胞小片是一种比较常见的提高母贝留核率的方法，从传统的紫药水、红药水处理小片；发展到采用金霉素、链霉素、四环素、呋喃类药物处理；近几年研究的热点集中在细胞小片的保养液，其中包括ATP、PVP、促珠泌素、细胞色素C、卵磷脂等保养液。使用保养液的目的大致有五个方面：一是维持细胞小片内外环境渗透压的平衡，保证细胞小片离体后不被干死；二是杀菌灭毒，避免病菌感染；三是加速伤口愈合，促进珍珠质分泌；四是维持细胞呼吸所需的中性环境；五是提高手术受体贝的成活率。上述的药物处理细胞小片的方法，在一定程度上提高了母贝的留核率和成活率，但是相对来说，作用时间不是很持久，长时间采用容易造成母贝的抗逆性反应。

珍珠的形成过程，通常是由软体部(通常是外套膜)的上皮细胞分泌一种与珍珠的化学组成很相近的粘液，经酶的作用和自然脱水等过程，形成层覆一层的珍珠结构，贝类的外套膜与贝壳和珍珠的形成有非常直接的关系。研究表明细胞小片的外表皮细胞有强的碱性磷酸酶活性，表明该酶与珍珠的形成有密切的关系，它不仅涉及蛋白质的分泌，还参与蛋白质的合成以及贝壳与珍珠质前身物质的形成与矿化过程。此外，碱性磷酸酶是一种金属酶，其活性中心主要是Mg²⁺、Zn²⁺。而具有该金属的螯合物，在一定程度上可以提高碱性磷酸酶的活性，从而促进珍珠的形成。生物组织液即母贝自身组织匀浆液，可以降低母贝对异己的识别能力，从而降低母贝对珠核的排斥力。

发明内容

本发明的目的是提供一种育珠免疫增强剂的制备方法，研究一种新的细胞小片保养液，来提高母贝的留核率和成活率。通过合成的Zn²⁺金属螯合物作为主体物质，添加适量的生物组织液作为调节剂，最后添加其他辅料，制备成为一种新型的珠母贝细胞小片保养液——免疫增强剂。其作用机理主要是通过化学和生物调控作用，降低母贝的分子识别能力，减少排斥反应，提高珠母贝的留核率，从而可以提高珍珠的产量和品质，进一步将带动南珠产业的发展，从而将繁荣我国海水珍珠产业。

本发明的育珠免疫增强剂制备包括三个步骤：

(1)Zn²⁺金属螯合物的诱导合成

采用溶剂挥发法合成本发明化合物，其步骤为

a.各取20mmol有机配体化合物(邻啡罗啉和水杨酸)，充分搅拌，过滤；

b.称量20mmolZnCl₂，用5ml蒸馏水溶解，搅拌使完全溶解，过滤；

c.将上述两种溶液混合，水浴加热，搅拌下滴加0.1mol/L的NaOH调节混合溶液pH值；

d.混合溶液冷却至室温，过滤，静置；

e.滤液放置一星期后得到本发明化合物。

Zn²⁺金属螯合物结构式如下：(见说明书附图)

本发明合成的螯合物是由一分子邻啡罗啉和水杨酸与一分子Cu²⁺配位合成。邻啡罗啉和水杨酸可以从试剂公司购买纯品。

(2)生物组织液的制备

在育珠过程中吐核的珠母贝或者是不能在插核的珠母贝为原材料，将这些贝的外套边缘组织取出，匀浆，制备成10％的生物组织液，于-4℃保存。

(3)育珠免疫增强剂的制备

育珠免疫增强剂成分及配比如下：

Zn²⁺金属螯合物        0.1-1.0g