[发明专利]HLA-G抗体制备方法及其在医学中的应用

权利要求书

1.HLA-G抗体制备方法，其特征在于利用HLA-G分子的抗原决定簇进行制备。

2.根据权利要求1所述，HLA-G的抗原决定簇由HLA-G分子特定区域的某些氨基酸序列构成。例如抗原决定簇A的序列位于HLA-G序列第83-103位，抗原决定簇B的序列位于HLA-G序列第106-129位，抗原决定簇C的序列位于HLA-G序列第198到230位，抗原决定簇D的序列位于HLA-G序列第283到315位，等等。HLA-G的其它抗原决定簇的位置不一一列举。每个抗原决定簇由5个以上氨基酸残基组成。

3.根据HLA-G抗原决定簇的氨基酸序列，利用人工合成法可以得到HLA-G的抗原决定簇的多肽片段；利用同HLA-G抗原决定簇氨基酸序列相对应的核酸片段，通过基因重组可以表达出与之相对应的抗原决定簇的多肽片段。

4.根据权利要求2、3制备的HLA-G抗原决定簇的多肽片段能够同HLA-G抗血清发生特异性反应，而不能同经过HLA-G吸收后的HLA-G抗血清发生特异性反应。

5.根据权利要求2、3制得的HLA-G抗原决定簇多肽片段同载体蛋白偶联制备成免疫原。

6.根据权利要求5所述，HLA-G多克隆抗体制备方法的特征在于利用权利要求5所制备的免疫原免疫家兔或其它可用动物，取其血清经分离、纯化制成的多克隆抗体。

7.根据权利要求6制备的多克隆抗体不但能够特异性地与HLA-G分子及其异构体特异性结合，同时也能同抗原决定簇的多肽片段及权利要求3制得的多肽片段发生特异性反应。

8.利用权利要求5制成的免疫原免疫小鼠或其它可用动物，将其脾脏淋巴细胞同骨髓瘤细胞杂交、优选制成的杂交瘤细胞株。

9.HLA-G单克隆抗体制备方法的特征在于利用权利要求8所制备的杂交瘤细胞株接种小鼠或其它可用动物，收集其腹水，经纯化制成的单克隆抗体。

10.根据权利要求9制备的单克隆抗体不但能够特异性地与HLA-G分子及其异构体结合，同时也能同抗原决定簇的多肽片段以及根据权利要求3制得的多肽片段发生特异性反应。

11.根据权利要求6、9所述，检测HLA-G的化学发光、电化学发光、时间分辨、金标等免疫分析试剂盒的特征在于利用权利要求6、9所制备的多克隆抗体或单克隆抗体为主要原料制备而成。化学发光等免疫分析检测HLA-G试剂盒具有广谱性、无放射性、超敏感性、可定量性，适合用于肿瘤早期诊断；金标免疫分析检测HLA-G的试剂盒具有简便、快速、廉价、不需仪器、可自检自测等特点，适合用于基层筛查早期肿瘤，实现恶性肿瘤早发现早治疗，把肿瘤消灭在萌芽状态，达到降低肿瘤死亡率的目的。

12.根据权利要求1、6、9所述，预防肿瘤术后复发所用的广谱抗肿瘤生物制剂的特征在于利用权利要求6和9所制备的HLA-G多克隆抗体或单克隆抗体为主要原料制备而成。HLA-G多克隆抗体和单克隆抗体经过人源化处理，即把动物IgG的F-C段换成人体IgG的F-C段制成嵌合抗体。利用嵌合抗体代替目前常规使用的化疗制剂预防肿瘤术后复发，不但能有效地杀灭癌细胞，防止肿瘤术后复发，而且避免了化疗药物的毒副作用。广谱抗肿瘤生物制剂也可用于治疗难以手术的肿瘤灶。

13.根据权利要求5所述，广谱肿瘤疫苗的特征在于利用权利要求5制备的免疫原为主要原料制备而成。其载体蛋白应是血蓝蛋白KLH或其它适合的蛋白。广谱肿瘤疫苗主要用于预防产生各种恶性肿瘤。也可用于治疗各种难以手术的恶性肿瘤病灶或用于预防肿瘤术后复发。