[发明专利]一种细胞培养用大孔微载体及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种大孔微载体，该大孔微载体呈球形，直径为200-500μm，孔径 为40-80μm，由丝素蛋白作为主要成分和壳聚糖在交联剂的作用下制得；

所述的大孔微载体的制备方法包括：

(a)将丝素蛋白溶液与壳聚糖醋酸溶液按比例混合，使得产生终浓度 为4-10w/v％的丝素-壳聚糖混合溶液；

(b)将所述丝素-壳聚糖混合溶液分散进入含乳化剂的油相中，得到 白色乳液；并向该白色乳液中缓慢加入交联剂，充分搅拌使水相交联固化；

(c)将步骤(b)中的白色乳液加入搅拌状态的pH为9-10的极性溶 剂中，并继续搅拌30-60分钟，过滤得到互不粘连的微球；

(d)并除去所述微球表面的油相，筛滤得到200-500μm的微球；

(e)除去微球中残留的交联剂，并冷冻干燥，得到所述大孔微载体。

2.一种制备权利要求1所述的大孔微载体的方法，该方法包括：

(a)将丝素蛋白溶液与壳聚糖醋酸溶液按比例混合，使得产生终浓度 为4-10w/v％的丝素-壳聚糖混合溶液；

(b)将所述丝素-壳聚糖混合溶液分散进入含乳化剂的油相中，得到 白色乳液；并向该白色乳液中缓慢加入交联剂，充分搅拌使水相交联固化；

(c)将步骤(b)中的白色乳液加入搅拌状态的pH为9-10的极性溶 剂中，并继续搅拌30-60分钟，过滤得到互不粘连的微球；

(d)并除去所述微球表面的油相，筛滤得到200-500μm的微球；

(e)除去微球中残留的交联剂，并冷冻干燥，得到所述大孔微载体。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述乳化剂为司班80，油 相为液体石蜡，其中司班80、液体石蜡的体积比为3∶100至5∶100。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述交联剂选为戊二醛。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述极性溶剂选自异丙醇、 丙酮和乙醇。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(b)中加入的交联 剂的量为每克干重的微载体加入2ml的2.5％戊二醛溶液。

7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(c)中所述搅拌为 250-400转/分的恒速搅拌。

8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在步骤(e)中，通过将 微球在甘氨酸溶液中浸泡2-4个小时而除去残留的交联剂。

9.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在所述步骤(e)之后还 包括消毒步骤。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述大孔微载体以钴60-γ 射线辐照消毒，或者将大孔微载体以蒸馏水或PBS溶液溶胀后高温灭菌。

11.权利要求1所述的大孔微载体在大规模动物细胞培养中的应用。