[发明专利]牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法有效

专利信息
申请号: 200910041985.1 申请日: 2009-08-20
公开(公告)号: CN101633948A 公开(公告)日: 2010-01-27
发明(设计)人: 刘冬梅;余以刚;梁洁英;吴晖;吴祖星;陈子剑;李晓凤;唐语谦 申请(专利权)人: 华南理工大学
主分类号: C12Q1/18 分类号: C12Q1/18;C12R1/07
代理公司: 广州市华学知识产权代理有限公司 代理人: 李卫东
地址: 510640广东*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 牛奶 内酰胺 抗生素 残留 试剂盒 检测 方法
【权利要求书】:

1.一种牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法,其特征在于包括如下步骤和工艺条件:

第一步将嗜热脂肪芽孢杆菌冻干粉置于肉汤液体培养基,于45~55℃,100~150rpm下培养24~36h,制成母发酵剂;以重量份数计,所述肉汤培养基原料配方为:蛋白胨1.0~1.5份,牛肉膏粉2.5~3.5份,氯化钠0.4~0.6份,蒸馏水94.4~96.1份;搅拌溶解均匀后用0.08~0.10MPa灭菌15~20min,冷却至45~55℃备用;

第二步以体积比为2~5∶100的比例,将母发酵剂接入生产培养基中,于50~65℃的发酵罐中进行培养,在培养过程用NaOH溶液调整pH为7.0~8.0,搅拌转速为100~150rpm,培养24h~36h后收集,得发酵菌悬液;以重量份数计,所述生产培养基原料配方组成为:蛋白胨1.5~3.0份,牛肉膏为2.5~3.5份,葡萄糖为1.0~2.0份,磷酸氢二钾0.010~0.030份,氯化钠0.4~0.6份,蒸馏水91.37~93.59份;搅拌溶解均匀后用0.08~0.10MPa灭菌15~20min,冷却至50~65℃备用;

第三步将所述发酵菌悬液于5000~8000rpm条件下,离心20~25min,舍弃上清液,收集菌泥A;

第四步在菌泥A中,按生理盐水与菌泥的体积比为1~5∶1加入生理盐水,混合均匀后于5000~8000rpm条件下,离心20~25min,舍弃上清液,收集菌泥;清洗2~3次,于5000~8000rpm条件下,离心20~25min,舍弃上清液,收集菌泥,放置4~10℃条件下48~120h,得菌泥B;

第五步按琼脂指示剂溶液与所述菌泥B的体积比为1~5∶1加入琼脂指示剂溶液,于60~70℃下混合均匀,得反应液,将所述反应液0.1~0.3mL分别装入孔板的每一孔或微量反应器中,每孔或微量反应器中的芽孢菌达到1.00×107~2.50×108cfu,盖上铝塑膜并进行热合封口,于60~70℃倒置0.5h后,顺置冷却至常温,并装入铝塑袋,防潮和避光保存,制成检测试剂盒;以重量份数计,所述琼脂指示剂溶液原料配方组成为:琼脂1.5~3.0份,溴甲酚紫0.0008~0.0015份,NaOH 0.015~0.020份,蛋白胨1.0~1.5份,牛肉膏粉2.5~3.5份,氯化钠0.4~0.6份,蒸馏水91.38~94.58份;搅拌溶解均匀后用0.08~0.10MPa灭菌15~20min,冷却至60~70℃备用;所述每孔或微量反应器中的反应液配方组成为:琼脂1.5~15.0mg,溴甲酚紫0.8~7.5μg,NaOH 15~100μg,蛋白胨1.0~7.5mg,牛肉膏粉2.5~17.5mg,氯化钠0.4~3.0mg,蒸馏水94.38~472.90mg,芽孢菌数为1.00×107~2.50×108cfu;

第六步在所述第五步的试剂盒每孔或微量反应器中加入牛奶样品0.05~0.25mL,用铝塑膜仔细密封,于60~65℃的水浴或恒温箱中恒温反应2小时15分~2小时45分,阴性样品的试剂盒每孔或微量反应器中由蓝色变成黄色,变色范围pH为5.2~6.8,表示抗生素残留呈阴性;阳性样品不变色,表示抗生素残留呈阳性。

2.根据权利要求1所述的牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法,其特征在于:第二步母发酵剂与生产培养基的体积比为3~4∶100。

3.根据权利要求1所述的牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法,其特征在于:所述第二步中NaOH溶液的浓度为1~2mol/L。

4.根据权利要求1所述的牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法,其特征在于:所述第一步的培养温度为50℃,培养24h。

5.根据权利要求1所述的牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法,其特征在于:所述第二步的培养温度为55℃,培养24h。

6.根据权利要求1所述的牛奶中β-内酰胺类抗生素残留试剂盒检测方法,其特征在于:所述第五步琼脂指示剂溶液与菌泥B的体积比为4-5∶1。

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