[发明专利]OATP1B1重要基因突变检测基因芯片

说明书

技术领域

本发明属于基因分析检测领域，具体地说是涉及一种基因检测芯片，更具体地 说是用于检测与高血压、恶性肿瘤、2型糖尿病、高胆固醇血症治疗药物的反应性 密切相关的有机阴离子转运多肽1B1(简称OATP1B1)常见重要基因突变的基因检测 芯片。

背景技术

据统计，我国高血压和糖尿病的患病人数分别约1.3亿和2000万，成人血脂异 常发生率约为18.6％，恶性肿瘤患者约180～200万，在目前和将来很长一段时间内， 药物仍将是以上重大疾病治疗的主要手段。肝脏是人体代谢和解毒药物及外源性物 质的主要器官，有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)是一种肝脏特异性分布的转运 体。除靶向转运非结合型胆红素、甲状腺激素等内源性物质外，OATP1B1介导多种 具有重要临床意义药物的肝脏跨膜转运，如抗恶性肿瘤药(伊立替康、甲氨喋呤)、 调血脂药(普伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、西伐他汀)、抗高血压 药(缬沙坦、奥美沙坦、波生坦)、抗高血糖药(瑞格列奈、那格列奈)等，与它们 的吸收、分布及毒物排泄等过程密切相关，进而关乎药物的疗效和毒副作用。

药物反应的个体差异是临床上极其普遍的现象，产生这种差异的原因有许多， 包括性别、年龄、体重、疾病状况在内的多种因素都可以导致不同病人对同一种药 物的反应出现量与质的差别，然而20多年来的遗传药理学研究结果表明其中最重 要、最根本的因素是遗传因素，即药物代谢酶、转运体和受体(药物作用靶点)的 基因多态性导致了其编码蛋白的功能改变，进一步使血药浓度和药物敏感性显著不 同，一言以蔽之，遗传变异导致了药物反应个体差异。

以他汀类降脂药普伐他汀为例，该药在肝细胞内可有效抑制HMG-CoA还原酶并 抑制胆固醇的合成，同时外周循环中药物浓度过高也可能造成最严重的致命性不良 反应-横纹肌溶解，研究发现某应用该药发生严重肌肉毒性的病人多为OATP1B1功 能严重缺陷的*15/*15基因突变者。通过提前鉴定携带有OATP1B1*15/*15基因突变 的携带者，及时换用其他药物，可有效降低横纹肌溶解的发生率，保障高风险者的 生命安全。

经过长期研究，目前国内外已发现OATP1B1的多个基因突变与相应药物的反应 性(疗效和毒副反应)密切相关，其中主要包括下列内容(表1)：

表1 OATP1B1常见重要基因突变及其功能意义

以上所述的OATP1B1的基因突变与高血压、恶性肿瘤、2型糖尿病、高胆固醇 血症等疾病的治疗药物在人体内的反应性密切相关，这里所说的反应性包括了药物 的疗效和安全性两个方面，同种同剂量的药物作用于拥有不同基因型的患者，有的 人恰好有效，有的人根本无效，还有的人会出现药物的毒副反应，因此利用各种基 因检测技术在治疗之前先确定病人的上述OATP1B1基因突变位点的基因型，根据检 测的结果调整患者的用药种类与剂量，可以使药物发挥最佳的疗效，最大限度地防 止毒副反应发生，这就是基因导向性的个体化用药新模式。目前该种用药模式已被 越来越多的科研人员、临床医生及患者所接受。

目前国内外最常用的基因突变检测方法有聚合酶链式反应-限制性片段长度多 态性分析(PCR-RFLP法)、序列特异性PCR、手工或自动测序等方法，这些方法不 仅操作繁琐、检测周期长、无法做到高通量，而且影响检测结果的因素众多，不易 控制，难以满足临床实际检测的要求，目前只在科研领域进行。

基因芯片(gene chip)，又称DNA芯片，是近些年在生物高科技领域内出现的 最具时代特征的重大科技进展之一，它将能反映样本中大量基因信息的基因探针(寡 核苷酸探针、cDNA克隆、PCR产物等)有序地固定在固相支持物(如醛基、氨基、 巯基、羧基等活性基团修饰的载玻片或硅片、尼龙膜、硝酸纤维素膜)上形成阵列， 通过与实际样本或扩增产物进行杂交反应和对荧光等杂交信号的检测，只需一次试 验，就可高通量地获得所有待检基因的信息。与其他方法相比较，基因芯片的检测 方法有多样品并行处理能力、分析速度快、所需样品量少、污染少、操作简单、价 格低廉等优点。因此利用基因芯片技术检测上述OATP1B1的常见重要基因突变，是 当下最好的选择，具有重要的现实意义。

目前尚未有对上述OATP1B1的常见重要基因突变进行全面系统检测的基因芯片 及其技术方案被披露。

发明内容