[发明专利]从福尔马林固定的毛发干内抽提DNA的方法无效
| 申请号： | 200910042864.9 | 申请日： | 2009-03-13 |
| 公开（公告）号： | CN101492486A | 公开（公告）日： | 2009-07-29 |
| 发明（设计）人： | 黄菊芳;曾乐平;陈旦;童建斌;王慧;罗学港 | 申请（专利权）人： | 中南大学 |
| 主分类号： | C07H21/04 | 分类号： | C07H21/04;C12N15/10 |
| 代理公司： | 中南大学专利中心 | 代理人： | 胡 奕 |
| 地址： | 410083*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 福尔马林 固定 毛发 干内抽提 dna 方法 | ||
1.一种从福尔马林固定的毛发干内抽提DNA的方法，其特征在于包含下列步骤：
(1)毛发干预处理：取毛发干，充分洗涤除尽杂质，随后依次用质量浓度2.0％的NaOH与2.0％的HCl洗涤，之后用无菌蒸馏水多次漂洗，再依次用梯度酒精洗涤，无菌条件下晾干备用；
(2)毛发干的修复处理：0℃～10℃下把毛发干在装有0.01mmol/L的柠檬酸钠溶液的匀浆器内磨碎，直到肉眼看不到毛发干碎片，转移研磨液至新的灭菌管中，沸水浴5～15min；自然降至室温后加入无水乙醇混匀，室温静置，离心，收集沉淀；
(3)抽提DNA：向沉淀中加入头发消化液和蛋白酶K溶液，37℃～57℃水浴，持续消化1～2小时；消化完毕后以酚/氯仿/异戊醇方法提取DNA；所述头发消化液的成分如下：Tris-Cl 10mmol/L pH为8.0、NaCl 100mmol/L、CaCl21.0mmol/L、DTT 20～500mmol/L、SDS质量百分比含量0.5％～5.0％、Triton X-100体积百分比含量0.5％～4.0％、其余为无菌双蒸水；蛋白酶K溶液的浓度为0.5mg～50mg/ml。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述头发消化液的成分如下：Tris-Cl 10mmol/L pH为8.0、NaCl 100mmol/L、CaCl21.0mmol/L、DTT40～500mmol/L、SDS质量百分比含量1％～5.0％、Triton X-100体积百分比含量1％～4.0％、其余为无菌双蒸水；所述蛋白酶K溶液的浓度为20mg～50mg/mL。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述头发消化液的成分如下：Tris-Cl 10mmol/L pH为8.0、NaCl 100mmol/L、CaCl21.0mmol/L、DTT 500mmol/L、SDS质量百分比含量4.0％、Triton X-100体积百分比含量4.0％、其余为无菌双蒸水；所述蛋白酶K溶液的浓度为50mg/mL。
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