[发明专利]亚麻微卫星DNA标记

说明书

技术领域

本发明涉及一种亚麻微卫星DNA标记，适用于亚麻品种分类、遗传关系鉴定和辅助育种。

背景技术

微卫星(Microsatel lite)，又称为简单序列重复(simple sequence repeat，SSR)或短串联重复(short tandem repeat，STR)，是以少数几个核苷酸(1-6个)为重复单位的串联重复DNA序列。由于微卫星具有高水平的杂合性和突变率、双亲遗传模式等优势，加之便于检测，费用低廉，因此广泛用于遗传图谱构建、基因定位、标记辅助育种、家系分析、品种鉴定以及进化分析等研究。如用微卫星标记研究樱桃品种间的亲缘关系(艾呈祥等，2007，果树学报，24(4)：460465)、用微卫星DNA标记进行猪品种分类的专利申请“适于猪品种分类的猪微卫星DNA标记”(公开号CN 1370834A)。

亚麻(Linum usitatissmum L.)是亚麻科(Linaceae)亚麻属(Linum)的一年生草本纤维植物，已经有六七千年的栽培历史。亚麻既是世界第3大纤维作物，又是5大油料作物之一。作为一种重要的经济作物，亚麻在微卫星分子标记方面的研究远远滞后于其他作物，大豆、棉花、水稻、葡萄、花生的SSR标记已有许多研究，并公开发表了大量可以直接利用引物序列，而现有亚麻的微卫星标记数量非常有限，仅有法国科学家Roose-Amsaleg等分离的28个微卫星标记(Roose-Amsaleg C等，2006，Molecular Ecology Notes，6(3)：796-799)。这严重制约了微卫星标记在亚麻遗传学、分子生物学方面的研究和应用。因此，迫切需要获得更多独立分离的、多态性丰富的亚麻微卫星标记。

发明内容

本发明旨在分离克隆微卫星DNA标记，建立亚麻的微卫星DNA的技术体系并利用这些分子标记进行品种分类，遗传关系分析和辅助育种。

实现上述发明目的的技术方案包括亚麻(CT)_n和(GT)_n微卫星富集文库的构建、含微卫星序列的阳性克隆的筛选及测序，得到17个含有(CT)_n和8个含有(GT)_n的微卫星克隆，确定了25个多态性丰富的微卫星标记LU1、LU2、LU3、LU4、LU5、LU6、LU7、LU8、LU9、LU10、LU11、LU12、LU13、LU14、LU15、LU16、LU17、LU18、LU19、LU20、LU21、LU22、LU23、LU24、LU25；LU1为214个核苷酸、LU2为265个核苷酸、LU3为328个核苷酸、LU4为250个核苷酸、LU5为173个核苷酸、LU6为202个核苷酸、LU7为363个核苷酸、LU8为199个核苷酸、LU9为206个核苷酸、LU10为270个核苷酸、LU11为511个核苷酸、LU12为196个核苷酸、LU13为302个核苷酸、LU14为196个核苷酸、LU15为393个核苷酸、LU16为314个核苷酸、LU17为369个核苷酸、LU18为394个核苷酸、LU19为356个核苷酸、LU20为305个核苷酸、LU21为462个核苷酸、LU22为249个核苷酸、LU23为308个核苷酸、LU24为258个核苷酸、LU25为616个核苷酸。

附图说明

图1是用LU1位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图2是用LU2位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图3是用LU3位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图4是用LU4位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图5是用LU5位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图6是用LU6位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图7是用LU7位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图8是用LU8位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图9是用LU9位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图10是用LU10位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图11是用LU11位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图12是用LU12位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。

图13是用LU13位点的特异性引物扩增8个亚麻品种DNA的PAGE电泳图。