[发明专利]普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及化合物柱前的衍生化反应及测定方法，具体涉及N^α-(5- 氟-2，4-二硝基苯基)-D-缬胺酰胺与普瑞巴林及其手性异构体在高沸点的非质子性有机溶剂 中于微波辅助条件下进行快速衍生化反应后，用非手性高效液相色谱法或非手性高效液相色 谱与质谱联用分离测定普瑞巴林手性异构体的方法。

背景技术

众所周知，柱前衍生化方法作为测定手性化合物含量的常用方法，也是一种高检测灵敏 度的检测方法。对有手性中心且无紫外吸收或紫外吸收较弱的化合物，可采用合适的衍生化 方法进行含量和手性异构体的准确测定。

普瑞巴林是一种弱紫外吸收的手性化合物，其化学名称为(S)-3-(氨甲基)-5-甲基己 酸，用于治疗癫痫和神经疼痛。普瑞巴林手性异构体几乎没有药理活性，其化学名称为(R) -3-(氨甲基)-5-甲基己酸，是普瑞巴林的重要杂质，也是控制普瑞巴林质量的重要指标。

通常，普瑞巴林原料药或用其制成的药物制剂中含有微量的普瑞巴林手性异构体，由于 普瑞巴林及其手性异构体的紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测普瑞巴林存在一定困难，检 测微量普瑞巴林手性异构体就更加困难。现有技术中，使用手性高效液相色谱柱直接分离测 定普瑞巴林手性异构体不但分离较差，且灵敏度低，试验成本高(参见：Journal of Chromatograph B 875(2008)148-153)。中国发明专利(专利号：200510057381.8，公开日：2006 年6月14日)公开了一种普瑞巴林手性异构体的衍生化分离测定方法。该方法采用最为常用 的N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物，例如N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L- 丙胺酰胺，作为衍生化试剂，与普瑞巴林在柱前通过水浴加热进行衍生化反应后，经减压干 燥除去低沸点有机溶剂后重组，再用非手性高效液相色谱法分离测定普瑞巴林手性异构体。 该方法的主要缺点在于：使用N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物与普瑞巴林衍 生化反应后，普瑞巴林手性异构体衍生物在普瑞巴林衍生物之后洗脱，因此其色谱峰展宽较 大，两衍生物之间的分离度较小时，普瑞巴林手性异构体检测的灵敏度较低，准确性较差； 使用该方法进行柱前衍生化反应需在水浴中进行长时间加热，且反应结束后需在五氧化二磷 和氢氧化钾的体系中进行减压干燥以去除低沸点的有机溶剂，再用其他有机溶剂溶解并过滤 以制备供试品溶液，后处理步骤非常繁琐，且五氧化二磷、低沸点有机溶剂废气的处理将增 加分离检测成本并对环境造成影响；高效液相色谱所采用的流动相含有不挥发的无机磷酸盐， 不适用于高效液相色谱-质谱联用分析系统。

发明内容

本发明中所提及的名词解释如下：

普瑞巴林指的是化学名称为(S)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸。

普瑞巴林手性异构体指的是(R)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸。

普瑞巴林消旋体指的是含(S)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸和(R)-3-(氨甲基)-5-甲基 己酸，且含(R)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸大于10％以上。

本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏、简便、快速并更经济的普瑞巴林及其手性 异构体的分离检测方法，所述方法具有检测灵敏度更高，成本更低，分析过程简单、快速， 且所使用的流动相更适合高效液相色谱与质谱联用等特点。

本发明提供了一种普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方法，包括：

A)在进色谱柱前，将普瑞巴林与衍生化试剂溶解在高沸点的非质子性溶剂中，于微波辅助 条件下进行快速衍生化反应，所述衍生化试剂为N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-D-氨基酸类化 合物；

B)对衍生物采用非手性高效液相色谱或非手性高效液相色谱与质谱联用分离测定。