[发明专利]一种提取赤潮甲藻核酸的方法无效
| 申请号： | 200910046877.3 | 申请日： | 2009-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN101824447A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 张凤英;马凌波;石彦红;徐兆礼 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12R1/89 |
| 代理公司： | 上海东方易知识产权事务所 31121 | 代理人： | 欧阳俊立 |
| 地址： | 200090 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提取 赤潮 核酸 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种提取赤潮甲藻核酸的方法，采取藻液，并进行显微镜计 数，其特征是取10mL藻液于50mL离心管中，置于100℃沸水浴中， 然后分别在不同煮沸时间10min，30min，60min，90min取样，然后 进行显微镜细胞计数，计算破碎率，同时以灭过菌的去离子水做空白 对照，检测核酸浓度；显微镜下用血球计数板计数，算出每毫升藻液 中煮沸破碎前数目(N0)和破碎后的数目(N1)，按下式计算破碎率： 破碎率＝(N0-N1)/N0×100％；以不同时间煮沸获得的藻细胞液 为模板，扩增塔玛亚历山大藻和环状异帽藻ITS序列，PCR引物序列 为：LH2：5’-AGGTGAACCTGCGGAAGGATC-3’和Diam：5’- CCTGCAGTCGACAKATGCTTAARTTCAGCRGG-3’，扩增条件：94℃预变性 5min；94℃变性30s，塔玛亚历山大藻55℃退火45s，环状异帽藻 58℃退火45s，72℃延伸1min，35个循环；最后72℃延伸7min， 取5uL扩增混合物用琼脂糖电泳检验，得到了预期的扩增片段，回收 该扩增片段并测序，序列比对后确认扩增序列为目的序列即提取的核 酸适合于分子生物学实验。
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