[发明专利]一种鉴别俄罗斯鲟精子活力的方法

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖技术领域，尤其涉及到俄罗斯鲟精子活力的一种鉴别方法。

背景技术

在生产实践中，鱼类精子活力是精子质量评价的重要指标。通常，活力高的精子受精能力也越强。因此，客观准确评价鱼类精子的活力具有非常重要的理论意义与应用价值。目前，评价鱼类精子活力主要有以下几种方法：一、利用显微镜观察记录精子的活动状况和运动时间，这种方法受人为因素的影响较大，不能客观反应精子的活动状况；二、利用鱼类精子直接开展受精试验，统计受精率、孵化率、出膜率等，这种方法受外界环境因子较多，且随着不同鱼类的早期发育时间的长短试验周期会有较大变化；三、最近又开发出一套计算机辅助分析系统(CASA)，用于分析精子的运动速率和运动距离等，这种方法能客观反应精子的活动情况，但仪器设备较为昂贵。

发明内容

本发明需要解决的问题是提供一种避免受人为因素、外界环境因子的影响，能客观准确评价、鉴别俄罗斯鲟精子活力的方法。

本发明配备试剂盒、紫外可见光分光光度计，其特征是在俄罗斯鲟繁殖季节，分批采集一定量的精子，用试剂盒测定不同批次精子中顶体酶、总ATP酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶和酸性磷酸酶的活性，如果精子中顶体酶活性高于36.18±2.54μIU/10⁶，ATP酶的活性高于198.47±14.43U/ml，琥珀酸脱氢酶的活性高于30.00±2.65U/ml，乳酸脱氢酶的活性高于6982.29±24.32U/L，肌酸激酶的活性高于1.94±0.05U/ml，酸性磷酸酶活性高于0.94±0.02U/ml，为精子活力较好；如果精子中顶体酶的活性介于21.55±0.79μIU/10⁶和36.18±2.54μIU/10⁶之间，ATP酶的活性介于110.19±2.32U/ml和198.47±14.43U/ml之间，琥珀酸脱氢酶的活性介于16.33±2.08U/ml和30.00±2.65U/ml之间，乳酸脱氢酶的活性介于5122.93±195.07U/L和6982.29±24.32U/L之间，肌酸激酶的活性介于1.49±0.14U/ml和1.94±0.05U/ml，酸性磷酸酶活性介于0.67±0.07U/ml和0.94±0.02U/ml之间，为精子活力一般；如果精子中顶体酶的活性低于21.55±0.79μIU/10⁶，ATP酶的活性低于110.19±2.32U/ml，琥珀酸脱氢酶的活性低于16.33±2.08U/ml，乳酸脱氢酶的活性低于5122.93±195.07U/L，肌酸激酶活性低于1.49±0.14U/ml，酸性磷酸酶活性低于0.67±0.07U/ml，则鉴别为精子活力差。

本发明的突出特点是通过建立不同活力的俄罗斯鲟精子相关能量代谢酶的活性数据，并提供了鉴别俄罗斯鲟精子中顶体酶、总ATP酶、琥珀酸脱氢酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶和酸性磷酸酶的活性的相应区分数据，通过精子相关能量代谢酶活性检测，根据酶活性的高低，应用本区分数据来鉴别俄罗斯鲟精子的活力。本方法与现有方法相比，更为客观，减少了通过人为观察判断的主观因素，具有准确客观的显著效果，不仅可检测样本数量大，所需时间短，而且鉴别准确率达到98％以上。利用本方法鉴别出的不同活力的精子开展受精试验，活力好的精子受精率可达到95％以上，活力一般的精子受精率只有50％左右，活力差的精子基本无受精能力。本方法所用仪器设备简单，成本低廉，不需要昂贵的仪器设备。

具体实施方式

在俄罗斯鲟繁殖季节，分批采集其精子，每批次取6尾鱼精子，用试剂盒(由南京建成生物工程研究所出品试剂盒)在紫外可见光分光光度计下分别测定不同批次精子中顶体酶、总ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和酸性磷酸酶(ACP)的活性，每个样重复三次，结果取平均值，运用统计软件对结果进行分析处理。如果精子中顶体酶活性高于36.18±2.54μIU/10⁶，ATP酶的活性高于198.47±14.43U/ml，SDH的活性高于30.00±2.65U/ml，LDH的活性高于6982.29±24.32U/L，CK的活性高于1.94±0.05U/ml，ACP活性高于0.94±0.02U/ml，判断为精子活力较好；如果精子中顶体酶的活性介于21.55±0.79μIU/10⁶和36.18±2.54μIU/10⁶之间，ATP酶的活性介于110.19±2.32U/ml和198.47±14.43U/ml之间，SDH的活性介于16.33±2.08U/ml和30.00±2.65U/ml之间，LDH的活性介于5122.93±195.07U/L和6982.29±24.32U/L之间，CK的活性介于1.49±0.14U/ml和1.94±0.05U/ml，ACP活性介于0.67±0.07U/ml和0.94±0.02U/ml之间，则判断为精子活力一般；如果精子中顶体酶的活性低于21.55±0.79μIU/10⁶，ATP酶的活性低于110.19±2.32U/ml，SDH的活性低于16.33±2.08U/ml，LDH的活性低于5122.93±195.07U/L，CK活性低于1.49±0.14U/ml，ACP活性低于0.67±0.07U/ml，则判断为精子活力差。运用此方法鉴别俄罗斯鲟精子活力较为准确和客观，鉴别率可达到98％以上。