[发明专利]一种从桃儿七中制备高纯度鬼臼毒素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从植物中提取鬼臼毒素的方法，特别是一种从桃儿七中制备高纯度鬼臼毒素的方法。

背景技术

鬼臼毒素(podophyllotoxin)又叫鬼臼素、鬼臼毒、鬼臼脂素，是一种具抗肿瘤活性的天然产物，属木脂素类化合物中的环木脂内酯。其化学名为[5R-(5α，5αβ，8aα，9α)]，5，8，8α，9-四氢-9-羟-5-(3，4，5-三甲氧苯基)呋喃(3’，4’：6，7)萘并-[2，3-d]-1，3-间二氧杂环烯-6(5αH)-酮。分子式：C22H2208，分子量：414.41，结构式为通式I：

鬼臼毒素可用于治疗尖锐湿疣、抑制疱疹病毒。同时自50年代鬼臼毒素被证实对肿瘤细胞有治疗效果以后，人们加强了对鬼臼毒素的研究并合成了大量的鬼臼毒素衍生物，筛选出了SP-G(鬼臼毒素葡萄糖与苯甲醛的缩合产物)、SP-I(鬼臼酸乙基酰肼)、依托泊甙(VP-16)和替尼泊甙(VM-26)等几种高活性抗肿瘤药物。

目前，鬼臼毒素主要从小檗科的八角莲属、桃儿七属和山荷叶属等属植物中分离得到。桃儿七(Podophyllum emodi Wall.var.chinense Sprague)又名大黄鬼臼、华鬼臼、桃耳七、小叶莲，为小檗科植物，生长于山中林下阴湿的地方，在我国资源十分丰富，主要分布在甘肃、陕西、西藏、青海等省。地下部分或果实入药，其性温味苦，有和血、止血、除风湿、解毒、消肿之功效。

目前从桃儿七中提取纯化鬼臼毒素的生产方法大致可分为化学溶剂提取分离法和常压柱层析分离法两类，传统的化学溶剂提取分离方法具有操作简单，产量大的优点，但提取纯化过程中都需要用到苯或甲苯等毒性较大的溶剂，给操作者造成危害较大，对环境污染严重，且所得产品纯度低。常压柱层析分离法虽然能得到高纯度的产品，但操作繁琐，且产量低，分离效率差，生产周期长，需消耗大量的洗脱剂，硅胶利用率低。

中国专利CN1253456C公告的一种从桃儿七中制备鬼臼毒素的方法，其是将桃儿七根茎粉碎后，加入90％乙醇溶液，在70℃回流提取3次，合并提取液，减压浓缩，得棕红色浆状物；在棕红色浆状物，加入石油醚，搅拌使其充分萃取，静置分层，弃去下层棕红色液体，将上层淡黄色液体静置结晶，离心过滤，得白色至淡黄色针状晶体，此即为鬼臼毒素粗品，继而用柱层析分离与纯化，得到鬼臼毒素精品。

在柱层析分离与纯化时，先用氯仿溶解鬼臼毒素粗品，再流过装有硅胶的减压层析柱；用醇类或酮类与氯仿的混合液进行洗脱，收集部分洗脱液，减压浓缩至干，得白色提取物，即为纯度91.1-98.75％的鬼臼毒素精品。

但是上述方法得到的鬼臼毒素精品纯度略低且不太稳定。

发明内容

为了避免以往工艺的缺点，节约资源，简化工序，缩短生产周期，直接分离得到高纯度的鬼臼毒素，并减少对操作者的危害，本发明提供了一种新的从桃儿七中制备高纯度鬼臼毒素的方法，该方法得到的鬼臼毒素纯度大于99％。对于保护日趋减少的鬼臼毒素资源，降低生产成本，促进鬼臼毒素应用，具有极为重要的意义。

为了实现本发明的目的，本发明所采用的技术方案是：

一种从桃儿七中制备高纯度鬼臼毒素的方法，分为原料用醇类提取得浸膏再经萃取得鬼臼毒素粗品和鬼臼毒素粗品高压柱层析两部分组成，具体步骤为：将桃儿七根茎经超微粉碎后，在超声波条件下用醇类溶剂加热50-60℃提取三次，合并三次提取液，合并提取液浓缩醇类溶剂，得到比重为1.0-1.2的红褐色浸膏；再加入1-2倍浸膏体积量的水得到鬼臼毒素醇水相；鬼臼毒素醇水相用等体积的二氯甲烷萃取三次，合并三次的二氯甲烷相，浓缩得到纯度为40％-50％的淡黄色鬼臼毒素粗品；淡黄色鬼臼毒素粗品用二氯甲烷溶解，上样至硅胶为300-400目的高压柱，用丙酮+二氯甲烷溶剂的混合洗脱液洗脱，收集产品段洗脱液，过滤浓缩后，烘干即得到纯度大于99％的鬼臼毒素精品。

为了使植物细胞中有效组分全部释放出来，将桃儿七根茎经超微粉碎至粒径10μm以下，使其小于植物细胞的平均直径15-25μm。

所用超声波的功率为1000-10000W。

在本发明中，所述二氯甲烷相用无水硫酸钠干燥过滤后浓缩干，60℃干燥，得到纯度为40％-50％的淡黄色鬼臼毒素粗品。

在本发明中，所述醇类溶剂为甲醇或乙醇，优选为甲醇。

所述高压柱的柱压为2.5～3.5MPa。内径为100-250mm，层析柱层径高比为1∶10-20。