[发明专利]造血干细胞移植后嵌合状态分析试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及利用STR检测造血干细胞移植后的嵌合状态的诊 断试剂盒及其应用。

背景技术

造血干细胞是血液成分之一，是生成各种血细胞的最起始细胞，又称造血多能干细胞， 存在于骨髓、胚胎肝、外周血及脐带血中。它既具有高度自我更新能力，又具有进一步分 化各系统祖细胞的能力。近代输血就利用这两种能力，对受血者用放射或大剂量化学药物 使其免疫系统受抑后输入献血者的造血干细胞，让它在受血者骨髓内留存并分化增殖，这 即是造血干细胞移植。造血干细胞移植现正日益广泛地用于白血病、许多恶性肿瘤及某些 遗传性疾病的治疗，由于造血干细胞可从骨髓、外周血、脐血、胎肝获得，因此临床上出 现了骨髓移植、外周血干细胞移植、脐血细胞及胎肝移植，而根据造血干细胞的来源又可 以分为自体、异体同基因(如双胞胎)、以及异基因(如父母、同胞或无血缘关系的供者)移 植。随着移植理论和技术的发展及骨髓库的完善，异基因造血干细胞移植在临床上的应用 越来越广泛。

为判断移植是否成功、监控病人的复发情况并及时地实施免疫抑制治疗、预后等，需 要对移植后供者细胞在受者体内的情况进行检测并观察其变化趋势，因此移植后动态检测 血细胞的嵌合状态对判断移植效果、实施临床早期干预治疗具有重要的意义。

从遗传学上说，异基因的供受者血细胞嵌合体本质上是两个不同基因型个体细胞的混 合。因此，利用染色体上的遗传标记可以区分供受者细胞并对供受者细胞比例进行定量分 析。传统的嵌合体分析手段包括基于第一代和第二代遗传标记检测的RFLP-PCR和 VNTR/STR-PCR技术，以及基于染色体片段分析的FISH技术，由于FISH仅能用于性别不合 的供受者，因此其应用局限性较大。短串联重复序列(short tandem repeat，STR)是基 因组染色体上的一些简单重复序列，STR具有高度多态性和体细胞稳定性，在家系中可以 稳定地遗传，STR-PCR现已成为鉴别不同个体DNA的强有力的工具，最早在法医学领域用于 亲子鉴定。由于该方法重复性好，敏感高效，因此已成为目前国际骨髓移植登记处推荐的检 测供受嵌合状态的金标准。

由于尚未有专门的嵌合体分析试剂盒，目前通常采用亲子鉴定试剂盒来实现STR-PCR 技术在嵌合体分析中的应用。

以下为国际上最著名的亲子鉴定试剂盒生产商-PE应用生物技术有限公司的产品的试 剂盒名称和同时扩增的位点：

AmpFlSTRPCR Amplification Kit：

D3S1358，D16S539，TH01，TPOX，CSF1P0，D7S820，Amelogenin；

PCR Amplification Kit：

CSF1P0，D2S1338，D3S1358，D5S818，D7S820，D8S1179，D13S317，D16S539，D18S51， D19S433，D21S11，FGA，TH01，TPOX，vWA，Amelogenin；

MiniFiler^TM PCR Amplification Kit：

D8S1179，D3S1358，TH01，D19S433，vWA，D5S818，TPOX；

ProfilerID PCR Amplification Kit：

D3S1358，vWA，FGA，D8S1179，D21S11，D18S51，D5S818，D13S317，D7S820，Amelogenin. ProfilerPCR Amplification Kit：

D3S1358，D5S818，D7S820，D8S1179，D13S317，D18S51，D21S11，FGA，and vWA.；

PCR Amplification Kit：

CSF1P0，D3S1358，D5S818，D7S820，D13S317，FGA，TH01，TPOX，and vWA SEfiler^TM PCR Amplification Kit：

D2S1338，D3S1358，D8S1179，D16S539，D18S51，D19S433，D21S11，SE-33，FGA，vWA SGMPCR Amplification Kit：