[发明专利]食品和饲料中猫源性成分的检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和核酸检测技术领域。更具体地，涉及一种快速 检测猫源性成分的方法和试剂盒。

背景技术

在动物产品原料和加工产品中，经常出现动物成分的掺假造假和无意污染 现象。人为掺假主要是不法商要降低成本或增加品质，以谋取巨额的经济利益， 而在食品和饲料的加工过程中，以低价格的原料替代高价格的原料或掺入到高 价格的原料中，这是一种欺诈行为。掺假造假的欺诈行为，被我国多部法律法 规禁止。

这种掺假造假、以次充好的行为除了影响我国经济，另一个最主要的是影 响人体健康和畜禽安全。疯牛病的发生和蔓延给欧盟等世界各国经济带来了重 大损失，疯牛病的传播途径主要是用哺乳动物源性饲料喂养反刍动物。

目前欧盟、美国、日本等各国均制定法律法规，禁止用哺乳动物源性饲料 喂养反刍动物，以防止疯牛病的发生和传播。为了彻底切断疯牛病的传播途径， 防止疯牛病在我国境内发生，农业部2002年发布《关于禁止在反刍动物饲料中 添加和使用动物饲料的通知》，2004年颁布实施了《动物源性饲料产品安全卫 生管理办法》，均禁止在反刍动物饲料中使用哺乳动物源性成分。猫作为一种 哺乳动物，一种人们饲养的动物/宠物，数量非常大。如果不严格管制，死猫的 组织可能会用于动物饲料的加工。如果动物性饲料中混有猫源性动物成分，可 能会带来动物疾病爆发流行的生物风险。

猫是人们不常食用的动物，其本身携带有狂犬病等人畜共患病，具有传播 疾病的风险。若食用不常食用的猫肉，可能会引发传播疾病。

目前我国还没有相应方法对食品和饲料中的猫源性成分进行检测。也就 是说，食品和饲料中的猫源性成分检测仍处于空白状态。建立食品和饲料中 猫源性成分检测方法，对于打击假冒伪劣食品、饲料，保障消费者权益和身 体健康，保护我国畜牧业安全和经济利益，避免国际贸易纠纷等方面具有十 分重要的意义，是迫在眉睫要解决的食品安全问题和检验检疫问题。

综上所述，鉴于目前尚没有快速简便地检测和鉴定猫源性成分的检测技 术，因此，本领域迫切需要开发新的快速简便地检测和鉴定猫源性成分的技 术。

发明内容

本发明的目的就是提供一种快速简便地检测和鉴定食品或饲料中是否 存在猫源性成分的技术。

在本发明的第一方面，提供了一种聚合酶链式反应方法，它包括步骤：

在聚合酶反应体系中进行聚合酶链式反应，所述的反应体系中含有扩增猫 源性成分的特异性引物对和猫源性成分特异性探针，并且所述引物扩增出的扩 增产物具有如SEQID NO：5所示的猫线粒体12S rRNA基因的核苷酸序列，并 且所述的猫源性成分特异性探针结合于如SEQ ID NO：5所示的猫线粒体12S rRNA 基因的核苷酸序列。

在另一类优选例中，所述的猫源性成分特异性探针具有SEQ ID NO：3所示 的核苷酸序列。

在另一类优选例中，所述的扩增猫源性成分的特异性引物对选自下组：

引物1：5’-agcacgaaag taactttaac acctcc-3’，SEQ ID NO：1；

引物2：5’-tgctagtagt tctctggcgg atag-3’，SEQ ID NO：2。

在另一类优选例中，所述的猫源性成分特异性探针是Taqman探针(尤其是 Taqman MGB探针)。

在另一类优选例中，探针序列如下：

5’-actacacgac agctaaga-MGB-3’，SEQID NO：3。

在另一类优选例中，所述方法还包括步骤：在聚合酶链式反应过程中或之 后，检测猫源性成分特异性探针发出的荧光信号。

在本发明的第二方面，提供了一种检测试剂盒，它含有以下试剂：

(a)扩增猫源性成分的特异性引物对，并且所述引物对扩增出的扩增产物 具有如SEQ ID NO：5所示的猫线粒体12S rRNA基因的核苷酸序列；和

(b)猫源性成分特异性探针，并且所述的猫源性成分特异性探针结合于如 SEQ ID NO：5所示的猫线粒体12S rRNA基因的核苷酸序列。

在另一类优选例中，所述的猫源性成分特异性探针具有SEQ ID NO：3所示 的核苷酸序列。

在另一类优选例中，所述的扩增猫源性成分的特异性引物对选自下组：