[发明专利]西沙海绵中一种环九肽类化合物及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，是产自西沙群岛附近海域的海洋动物棕色扁海绵Phakellia fusca中的一种具有抗肿瘤活性的新的环九肽类化合物。

背景技术

海绵是一种低等的多细胞动物，其分布广泛但常含有很多结构罕见的具有抗癌活性的次生代谢产物，因此一直是海洋天然产物化学家首选海洋生物研究对象。本发明的药源材料Phakellia fusca海绵属寻常纲(Demospongiae)软海绵目(Halichondrida)小轴海绵科(Axinellidae)海绵。2002年，曾从我国南海西沙永兴岛上采集的P.fusca海绵中发现了1个新的环肽phakelliastatin 12并已申请专利(申请号：01113389.9)。之前的所有Phakellistatins类环肽化合物均是由美国亚利桑那州立大学Pettit小组从Phakellia属海绵中发现的，但至今未见有关具有抗肿瘤活性的新的环九肽类化合物的报道。

发明内容

本发明提供一种从中国西沙群岛附近海域的棕色扁海绵中分离到新的环九肽类化合物，其化学结构式如下：

本发明化合物的制备方法如下：

1.提取，制备总提物：

将干燥的棕色扁海绵(P.fusca)粉碎后，按常规用95％乙醇冷浸提取，得提取液，将提取液浓缩得浸膏，加入50％的乙酸乙酯水溶液进行提取，得乙酸乙酯总提物。

2.分离纯化：

1)制备粗提物：将乙酸乙酯总提物用90％甲醇混悬，按常规经石油醚脱脂后，将甲醇水层用正丁醇萃取，得粗提物；

2)分离纯化环肽类化合物：将粗提物上Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以纯甲醇为洗脱剂，根据薄层层析检识结果，收集含有环肽类化合物的洗脱液部分，再进行反相硅胶柱色谱，以体积比为1∶1-1∶0的甲醇/水混合溶剂梯度洗脱，再以反相高效液相(55％甲醇/水，流速1.5ml/min，检测波长为280nm)制备，得本发明化合物C₄₈H₆₈N₁₂O₁₄。

体外活性试验证明，本发明化合物对P388、BEL-7402、SPC-A-1、HAC和Colo-26等多种不同的肿瘤细胞均有一定的抑制活性。因此可用于制备抗肿瘤药物。

本发明化合物制备方法简单，抗肿瘤活性显著。本发明为研究和开发新的抗肿瘤药物提供了新的先导化合物，为开发利用我国海洋药用资源提供了科学依据。

具体实施方式

现结合实施例对本发明作详细描述。

实施例1.制备本发明化合物

取干燥粉碎后的棕色扁海绵15kg，分别用95％乙醇50L冷浸提取8次，每次一周，合并提取液，提取液经减压浓缩得浸膏，浸膏用50％的乙酸乙酯水溶液进行提取，得乙酸乙酯总提物，乙酸乙酯总提物用90％甲醇混悬，用石油醚脱脂；将醇水层用正丁醇萃取，得粗提物50g；

将上述粗提物50g进行Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以纯甲醇为洗脱剂，根据薄层层析检识结果，收集含有环肽类化合物的洗脱液部分，再进行反相硅胶柱色谱，以体积比为1∶1-1∶0的甲醇/水混合溶剂梯度洗脱，再以反相高效液相(55％甲醇/水，流速1.5ml/min，检测波长为280nm)制备，得化合物C₄₈H₆₈N₁₂O₁₄，其理化性质和核磁共振谱数据如下：

化合物C₄₈H₆₈N₁₂O₁₄：白色玻璃状粉末。ESI-MS中显示有[M+H]⁺峰1037.54、[M+Na]⁺峰1059.55，确定其分子量为1036。核磁共振谱数据见表1。

表1化合物C₄₈H₆₈N₁₂O₁₄的核磁共振谱数据(DMSO-d₆，600MHz/150MHz)

体外抗肿瘤活性实验：

实验使用的肿瘤细胞株为上海天甲公司提供的P388(小鼠白血病)、BEL-7402(人肝癌)、SPC-A-1(人肺癌)、HAC(小鼠肝癌腹水瘤)、Colo-26(小鼠结肠癌)。