[发明专利]罗斯福火星花的组织培养方法

权利要求书

1.罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)无菌材料的获得

在春季挖取罗斯福火星花大球茎旁的小球茎，除去外面包裹的茎片，用自来水冲洗1-3h，再于超净工作台上，依次利用质量浓度为70-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成0.5-2cm的带腋芽的节段，节段接种于小球茎诱导培养基上；

(2)芽的分化和增殖

节段接种于小球茎诱导培养基上1-3周后，其基部开始膨大，出现黄绿色突起，3-4周后节段上可以看见芽分生组织，再培养1-2个月，有0.1-0.3cm大小的小球茎长出，将小球茎切下移入球茎增殖培养基中进行增殖培养，球茎基部的愈伤组织较多，但小球茎仍增殖较快，生长发育良好；

(3)小球茎壮苗培养

在小球茎诱导培养基里诱导出的小球茎呈丛状分布，每丛有4-6个球，将小球茎再分成小丛，每丛有1-3个芽，然后将分成小丛的小球茎转至壮苗培养基上，小球茎迅速膨大，20-30天后可以长到0.3-0.5cm；

(4)生根培养

取0.3-0.5cm的小球茎，转接入生根培养基中诱导生根，8-15天后小球茎幼苗的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以长至2-4cm，根系粗壮，须根众多，生根率为90-100％；

(5)炼苗与移栽

在生根培养30-35天，根系长至2-3cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化25-40天，即可移栽室外，并给予肥水管理。

2.根据权利要求1所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的小球茎诱导培养基包括MS+6-BA0.1-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L。

3.根据权利要求2所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的小球茎诱导培养基优选MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。

4.根据权利要求1所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的球茎增殖培养基包括MS+6-BA0.5-5.0mg/L。

5.根据权利要求4所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的球茎增殖培养基优选MS+6-BA3.0mg/L。

6.根据权利要求1所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基包括MS+6-BA1.0-3.0mg/L。

7.根据权利要求6所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基优选MS+6-BA2.0mg/L。

8.根据权利要求1所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基包括MS+NAA0.05-0.2mg/L。

9.根据权利要求8所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基优选MS+NAA0.1mg/L。

10.根据权利要求2或4或6或8所述的罗斯福火星花的组织培养方法，其特征在于，所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉4-8g/L，培养基pH5.5-6.0，培养温度24-26℃，光照1500-2500lx。