[发明专利]一种结核多价表位的基因疫苗及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及基因工程疫苗领域。

背景技术

结核病是一种人畜共患的慢性消耗性传染病。随着爱滋病患者人数的增 加、抗药性菌株的产生等，结核病的发病率有逐年增加的趋势。国外有关资 料报导，目前世界上约有10～20亿人口感染有结核杆菌，每年大约有三百 万人死于结核病，同时又有1000万新病例出现。我国目前有上亿人感染有 结核分枝杆菌，结核病患者约600万人，每年因治疗不及时造成死亡的人数 约25.6万余人。如果不尽快改进结核病的控制措施，将有2亿多人发展成 活动性肺结核。牛结核是家畜的一种慢性传染病且能传染给人。人畜结核病 的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因。如果奶牛患有结核病，不但 影响泌乳量和乳汁的营养成份，而且可通过各种途径传染给人。而控制牛结 核病传播最有效的方法是对于感染牛群的大规模屠宰，但是这对于大多数国 家来讲，无疑将造成了一项难以承受的经济负担。另外一条有效的途径，就 在于使用疫苗免疫，防患于未然。

传统的卡介苗(BCG)免疫保护效果较差，迫切需要寻找一种新的替代疫 苗。DNA疫苗是90年代兴起的一种新的疫苗技术，具有可诱发体液和细胞免 疫应答等优点，因此越来越受到研究者的重视。但随着越来越多的研究发现， DNA疫苗在较大个体动物中诱导的免疫应答较弱，因此保护效果也较差。追 寻其原因，其中非常重要的一条是DNA疫苗免疫机体后，大部分被降解，极 少被宿主细胞所吸收。另一方面，单一抗原诱导的免疫保护效果有限。

发明内容

本发明所要解决的技术问题提供了一种结核多价表位基因疫苗及其用途。

为此，本发明公开了一种结核多价表位的基因疫苗，其特征在于该基因疫 苗包含能有效编码含有ESAT6抗原的Th细胞表位、MPT64抗原的CTL表位、 38kD抗原Th表位和/或CTL表位的融合蛋白的核苷酸序列的表达载体。

本发明的发明思路为通过基因工程技术人为将结核抗原的多个T/B细胞 的表位串联，插入到表达质粒，构成多表位核酸疫苗，接种后只诱导针对保 护性表位的免疫应答，将大大提高疫苗的有效性，降低非免疫刺激序列对宿 主产生的毒害，减少接种量。

在一实施方式中，所述融合蛋白中所述ESAT6抗原的Th细胞表位、MPT64 抗原的CTL表位、38kD抗原Th表位和所述CTL表位间可以任意顺序直接连 接或通过连接肽连接，所述连接肽的氨基酸序列包括但不限于，例如： (GGGGS)_N或(GGGS)_N或(GGS)_N或(AAY)_N，其中N是大于或等于1的整 数，G表示甘氨酸，S表示丝氨酸，A表示丙氨酸，Y表示酪氨酸。其中优 选(AAY)_N。

在一实施方式中，所述所述ESAT6抗原的Th细胞表位优选氨基酸序列如 SEQ ID NO.1所述ESAT6抗原51-70位的Th细胞表位。

在一实施方式中，所述MPT64抗原的CTL表位优选的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所述MPT64抗原190-198位的CTL表位。

在一实施方式中，所述所述38kD抗原Th表位优选的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所述38kD抗原的71-81位的Th表位。

在一实施方式中，所述38kD抗原CTL表位优选的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所述38kD抗原的166-175位的CTL表位。

在一实施方式中，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.5所述。

在一实施方式中，所述表达载体可为噬菌体、疱疹病毒、腺病毒、腺相关 病毒、慢病毒、脊髓灰质炎病毒、牛痘病毒或禽痘病毒，其中优选腺病毒。

另一方面，本发明还公开了上述结核多价表位的基因疫苗在制备预防结核 药物中的应用。

本发明的创新点是针对结核病保护性免疫主要依赖于细胞免疫的特点，选 用三个抗原的T细胞识别表位来构建多价表位基因疫苗。本发明选用的抗原 表位均经实验证实为很有效T细胞表位，将这些表位连接在一起后，将大大 提高疫苗的有效性，降低非免疫刺激序列对宿主产生的毒害，减少接种量。

附图说明

图1.结核表位DNA疫苗结构图；

图2.转染重组质粒的EL-4细胞的总RNA电泳；