[发明专利]利用pts基因和RNA干扰ads基因提高青蒿广藿香醇含量的方法

权利要求书

1.一种利用pts基因和RNA干扰ads基因提高青蒿广藿香醇含量的方法，其特征在于，包括步骤为：

步骤一，获得青蒿素生物合成途径关键酶基因ads部分序列，广藿香醇生物合成途径关键酶基因pts全部阅读框序列和拟南芥中质体定位信号肽的tp片段；

所述的ads部分序列如SEQ ID NO.1中1054bp到1427bp所示；

步骤二，将获得的ads基因部分序列构建成发夹结构，然后将发夹结构和质体定位的pts基因分别连于表达调控序列上，得到含adsi和质体定位的pts基因的植物表达载体；

步骤三，用含adsi和质体定位的pts基因的植物表达载体转化根癌农杆菌；

步骤四，利用所构建的根癌农杆菌菌株转化青蒿外植体，PCR检测，获得转基因青蒿植株；

步骤五，对获得的转基因青蒿中广藿香醇含量进行测定。

2.根据权利要求1所述的利用pts基因和RNA干扰ads基因提高青蒿广藿香醇含量的方法，其特征是，步骤二中，所述质体定位的pts基因由P35S或cyp71av1基因启动子启动。

3.根据权利要求1所述的利用pts基因和RNA干扰ads基因提高青蒿广藿香醇含量的方法，其特征是，步骤四中，所述PCR检测具体为，分别设计合成检测adsi和检测质体定位的pts基因的引物，进行DNA扩增，紫外线下观察到目的条带为阳性的植株即为转基因青蒿植株。

4.根据权利要求1所述的利用pts基因和RNA干扰ads基因提高青蒿广藿香醇含量的方法，其特征是，步骤五中，所述测定具体为：HPLC-ELSD法检测，色谱柱C-18反相硅胶柱，流动相为甲醇与水，柱温30℃，流速1.0mL/min，进样量10μL，蒸发光散射检测器漂移管温度40℃，放大系数为7，载气压力5bar。

5.根据权利要求4所述的利用pts基因和RNA干扰ads基因提高青蒿广藿香醇含量的方法，其特征是，所述的流动相中甲醇与水的体积比为70∶30。