[发明专利]人体外周血淋巴细胞培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种人体外周血淋巴细胞培养基及其应用。

背景技术

人体外周血液中的小淋巴细胞，几乎都处在GI期(GO期)，一般情况下是不再分裂的， 在培养液中加入植物凝血素PHA时，这种小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，随后进入 有丝分裂，这样经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得部分有丝分裂细 胞。这种方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒性学等方面广泛应用。研究证实， 许多因素与细胞培养产生密切相关，常见的原因有：

(1)无污染环境：培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。当细胞放置于体 外培养时，与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代谢 物质积累等，可导致细胞死亡。因此在进行培养中，保持细胞生存环境无污染、代谢物及 时清除等，是维持细胞生存的基本条件；

(2)恒定的温度：维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。人体细胞培养的 标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。 培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比； 人体细胞在39-40℃1小时，即能受到一定损伤，但仍有可能恢复；在40-41℃1小时，细 胞会普遍受到损伤，仅小半数有可能恢复；41-42℃1小时，细胞受到严重损伤，大部分细 胞死亡，个别细胞仍有恢复可能；当温度在43℃以上1小时，细胞全部死亡；

(3)气体环境：气体是人体细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧 化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种 成分。开放培养时一般把细胞置于95％空气加5％二氧化碳混合气体环境中；

(4)恒定的PH值：二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁殖所需成分，它在 细胞培养中的主要作用在于维持培养基的PH值。大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离这 一范围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利 于细胞生长。细胞培养液pH浓度的调节最常用的为加NaHCO₃的方法，因为NaHCO₃可供CO₂， 但二氧化碳易于逸出，故最适用于封闭培养，而羟乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)因其对细胞 无毒性，也起缓冲作用，有防止pH迅速变动的特性而用于开放细胞培养技术中，其最大优 点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值；

细胞培养基是培养细胞中供给细胞营养和促使细胞生殖增殖的基础物质，也是培养细 胞生长和繁殖的生存环境。

培养基的种类很多，按其物质状态分为半固体培养基和液体培养基两类；按其来源分 为合成培养基和天然培养基。

(1)合成培养基：如：1640等合成培养基是根据细胞所需物质的种类和数量严格 配制而成的。内含碳水化合物、氨基酸、脂类、无机盐、维生素、微量元素和细胞生长因 子等。单独使用细胞虽有生存但不能很好的生长增殖。

(2)天然培养基：使用最普遍的天然培养基是血清，基本以牛血清最普遍。由于血 清含有多种细胞因子、促贴附因子及其多活性物质。与合成培养基合用，能使细胞增殖生 长。常见使用量为5-20％。

将合成培养基能使细胞生存的特性和天然培养基能使细胞增殖生长的特性相结合，使 两种培养基的特性都能获得发挥。但现有的这种天然培养基与合成培养基配合使用的培养 基配方虽然能使部分细胞生存，但不能达到使淋巴细胞较好的生长增值并进行有丝分裂表 达，缺乏各组份间的合理有效配比，而天然培养基属于动物血清且存在多种干扰培养淋巴 细胞生长的不利因子，因此并不能直接有效模拟人体血液中环境，试剂的稳定性也不好。

发明内容

本发明的目的是提供一种人体外周血淋巴细胞培养基及其应用。本发明提供的细胞培 养基淋巴细胞转换率与淋巴细胞分裂指数高，试剂稳定性好，可为染色体核型分析临床诊 断提供强有力的依据。

本发明的细胞培养基，是将合成培养基能使细胞生存的特性和天然培养基能使细胞顺 利增殖生长的特性相结合，使两种培养基的特性都能获得最大的发挥和最优化的组合。

本发明的人体外周血淋巴细胞培养基含下列原料成分及重量百分比：

RPMI1640液体培养基    77-81.9％