[发明专利]3-甾酮-9α-羟基化酶基因、3-甾酮-9α羟基化酶还原酶基因、相关载体和工程菌及应用

权利要求书

1.一种3-甾酮-9α-羟基化酶基因，其特征在于，所述3-甾酮-9α-羟基化酶基因编码SEQ IDNO：2所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的3-甾酮-9α-羟基化酶基因，其特征在于，所述3-甾酮-9α-羟基化酶基因与SEQ ID NO：1所示序列的第1328-2516位核苷酸序列具有70％以上的一致性或与所述SEQ ID NO：1所示序列具有60％以上的一致性。

3.根据权利要求2所述的3-甾酮-9α-羟基化酶基因，其特征在于，所述3-甾酮-9α-羟基化酶基因与SEQ ID NO：1所示序列的第1328-2516位核苷酸序列具有87％以上的一致性。

4.根据权利要求1所述的3-甾酮-9α-羟基化酶基因，其特征在于，所述3-甾酮-9α-羟基化酶基因来源于快速生长型分枝杆菌Mycobacterium neoaurum NwIB-01，保藏编号是CCTCC M 209094。

5.一种3-甾酮-9α-羟基化酶，其特征在于，所述3-甾酮-9α-羟基化酶是SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

6.一种基因工程表达载体，其特征在于，所述表达载体整合有权利要求1所述的3-甾酮-9α-羟基化酶基因。

7.根据权利要求6所述的基因工程表达载体，其特征在于，所述表达载体是细菌表达载体、酵母表达载体或哺乳动物表达载体。

8.根据权利要求7所述的基因工程表达载体，其特征在于，所述细菌表达载体是大肠杆菌表达载体、链霉菌表达载体或分枝杆菌表达载体。

9.根据权利要求8所述的基因工程表达载体，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体是pET表达载体，所述链霉菌表达载体是pLMJ链霉菌-大肠杆菌穿梭表达载体，所述分枝杆菌表达载体是pFZ36分枝杆菌整合载体或pAL5000或pFZ2分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达载体。

10.一种基因工程表达菌株，其特征在于，所述基因工程表达菌株含有权利要求6所述的基因工程表达载体或者整合有权利要求1所述的3-甾酮-9α-羟基化酶基因，其中所述基因工程表达载体是细菌表达载体。

11.根据权利要求10所述的基因工程表达菌株，其特征在于，所述细菌表达载体是大肠杆菌表达载体、链霉菌表达载体或分枝杆菌表达载体，相应地，所述基因工程表达菌株是大肠杆菌、链霉菌或分枝杆菌。

12.根据权利要求11所述的基因工程表达菌株，其特征在于，所述大肠杆菌表达载体是pET表达载体，所述链霉菌表达载体是pLMJ链霉菌-大肠杆菌穿梭表达载体，所述分枝杆菌表达载体是pFZ36分枝杆菌整合载体或pAL5000或pFZ2分枝杆菌-大肠杆菌穿梭表达载体，相应地，所述大肠杆菌是BL21菌株，所述链霉菌是变铅青链霉菌Streptomyceslividans，所述分枝杆菌是Mycobacterium sp.NRRL B-3683、Mycobacterium sp.NRRLB-3805、Mycobacterium smegmatism、Mycobacterium fortuitum、Mycobacterium gilvum、Mycobacterium neoaurum、Mycobacterium Phlei、Mycobacterium avium或Mycobacteriumvanbaalenii。

13.根据权利要求10所述的基因工程表达菌株在降解甾醇制备9α-羟基雄甾-4-烯-3，17-二酮中的应用。

14.根据权利要求10所述的基因工程表达菌株在对3-酮甾体化合物进行9α-羟基化反应制备3-酮-9α-羟基甾体化合物中的应用。

15.一种新金分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum)，所述新金分枝杆菌的保藏编号是CCTCC M 209094。

16.根据权利要求15所述的新金分枝杆菌，其特征在于，包括权利要求1所述的3-甾酮-9α-羟基化酶基因和编码SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列的3-甾酮-9α-羟基化酶还原酶基因。