[发明专利]抗骨桥蛋白OPN单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗骨桥蛋白OPN单克隆抗体。具体而言，本发明涉及制备天然骨桥蛋白的方法，使用所产生的天然骨桥蛋白制备产生抗骨桥蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，有该杂交瘤细胞株产生单克隆抗体，以及本发明单克隆抗体在制备治疗骨桥蛋白介导的疾病用的药物以及制备检测骨桥蛋白用的试剂盒中的用途。

背景技术

骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是细胞外基质(ECM)中一重要的功能性蛋白，最早由骨基质分离出，是一富含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(ArgGlyAsp，RGD)序列的分泌型糖基化磷蛋白，相对分子质量约为40-75KDa。起初认为OPN参与骨的吸收，与骨组织的矿化有关，现发现OPN在人体组织中分布广泛，具有多种功能，参与平滑肌细胞增生、动脉粥样硬化，特别是近年研究发现OPN与肿瘤细胞生长、增殖和侵袭、转移密切相关，近年Yeatman等应用基因表达图谱技术来筛选新的肿瘤标记物，OPN被确定为临床上首选标记物。

OPN在诊断及预后评估中的应用：由于OPN广泛存在于人体组织及血、尿、乳汁等体液中，这一特征使其有可能成为一种优质的、无损伤性的诊断标记物、肿瘤筛查指标，或用来判断患者的预后。Le等利用微阵列、Northern印迹和Western印迹等手段证明，组织缺氧时抗癌基因的表达下调，而OPN基因的表达上调；并且进一步发现血清OPN水平和头颈部鳞癌患者的肿瘤缺氧状况有关，利用线性相关分析发现较高的血清OPN水平往往导致较高的近期内复发风险和较差的预后。由此提出了把测量血清OPN作为一种无创性判断肿瘤患者预后的方法的可能性。骨桥蛋白与肿瘤的转移及患者预后的密切关系已引起不少学者高度重视。Tuck等研究认为，OPN表达强弱与乳腺癌恶性程度相关，血浆OPN正常参考值为14～64ng/ml，若大于此值则提示肿瘤可能已发生了转移。Schorge等以血清OPN和CA125水平来评估直肠癌患者预后价值，发现直肠癌患者血清OPN均值为178ng/ml，CA125均值为812U/ml，术后二者均明显下降，值得关注的是，9O例复发患者OPN再度升高，且与CA125比较平均提前3个月。Wong等对72例非分化型鼻咽癌(NPC)患者接受放疗前血清OPN水平检测证实，NPC组平均为184.66ng/ml，远高于正常组的75.89ng/ml，且OPN水平与患者临床病理分级及颈部淋巴结转移相关。Coppola等对一组包括头颈、食管、乳腺、肺、肝、胃肠、膀胱、子宫等全身实体肿瘤组织大宗病例OPN表达研究比较发现，OPN蛋白表达普遍增高，尤其在胃肠、泌尿生殖和妇科系统，并与肿瘤临床分级密切相关，Rudland等对333例乳腺癌组织切片经免疫组化进行

回顾性分析发现OPN表达阴性患者平均存活时间大于224个月，而阳性患者仅为68个月。Pan等应用RT-PCR半定量法结合原位杂交研究发现，OPN在肝癌组织中表达明显增强，OPN mRNA相对表达量在复发组为不伴复发组的3倍，而且OPN表达与肿瘤分期、血甲胎蛋白水平相关，认为OPN是临床监测肝癌早期复发的一个可靠指标。

OPN在治疗中的应用：OPN是多种肿瘤播散的关键细胞因子，过去的研究提示在几种肿瘤模型中，针对OPN及其受体从基因启动到信号传导途径的成功干预，将有效地降低肿瘤的生物学恶性程度，延长患者的生存时间，提高其生存质量。Hirama等则认为通过干扰OPN的功能来抑制血管生成是将来从分子水平治疗肿瘤的一个有效途径。Overgaard等通过随机双盲对照实验发现，头颈部肿瘤患者血清中的OPN浓度越高，则放疗的效果越差，但服用尼莫拉唑后能提高疗效。血清OPN浓度较高的患者往往临床上表现出来的缺氧症状比较明显，在放疗中若能注意对这部分患者缺氧的纠正，则能得到比较好的放疗效果。