[发明专利]一种将目的DNA片段插入载体中的方法无效
| 申请号： | 200910051959.7 | 申请日： | 2009-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN101899467A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 肖爱军;邵标;赫英俊 | 申请（专利权）人： | 上海捷瑞生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 上海智信专利代理有限公司 31002 | 代理人： | 胡美强 |
| 地址： | 200233 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 目的 dna 片段 插入 载体 中的 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种将目的DNA片段插入载体中的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)设计并合成扩增目的DNA片断的引物，该引物的最外侧有3～20个碱基与线性载体最外侧完全互补，用该引物扩增目的DNA片段，得到两侧最外端增加了与线性载体两侧最外端完全互补的3～20个碱基的目的DNA片段；
2)将步骤1)中得到的目的DNA片段和线性载体混合，加入同源外切重组酶进行反应，所述的同源外切重组酶是同时具有3’端至5’端外切酶活性和同源重组酶活性的重组酶，反应得到插入了目的DNA片段的重组载体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的同源互补序列和目的DNA片段碱基序列之间还加入限制性内切酶酶切位点的碱基序列。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的目的DNA片段的长度500bp～4000bp。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的同源外切重组酶是上海捷瑞生物工程有限公司的Ezfusion酶。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的载体是质粒pET15b、pUC57、pBluescriptII SK(+)、pET28a或pIRES。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述的线性化载体是平末端或粘性末端。
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