[发明专利]一种史氏鲟精子诱导西伯利亚鲟雌核发育的方法无效
| 申请号： | 200910052255.1 | 申请日： | 2009-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN101569293A | 公开（公告）日： | 2009-11-04 |
| 发明（设计）人： | 张涛;庄平;章龙珍;刘鉴毅;赵峰;冯广朋;黄晓荣;侯俊利;闫文罡;田美平;颜世伟;马境 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院东海水产研究所 |
| 主分类号： | A01K61/00 | 分类号： | A01K61/00 |
| 代理公司： | 上海泰能知识产权代理事务所 | 代理人： | 黄志达;谢文凯 |
| 地址： | 200090*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 史氏鲟 精子 诱导 西伯利亚 核发 方法 | ||
1.一种史氏鲟精子诱导西伯利亚鲟雌核发育的方法，包括：
(1)史氏鲟精子遗传物质的灭活
采集史氏鲟精子，镜检选取活力90％以上的用于紫外线灭活，取部分精液于8000r/min下离心15min，分离精浆，将精液与精浆按1∶4的体积比混合，置于4℃预冷的培养容器中，将培养容器置于铺有碎冰的摇床上，振荡频率90rpm，培养容器正上方放置有2支15W的紫外灯，以0.1mJ/(cm2.s)的紫外线照射精子6min，精子紫外线灭活剂量为36mJ/cm2；
(2)西伯利亚鲟未受精卵的采集及史氏鲟灭活精子的授精
选择性成熟的西伯利亚鲟雌鱼，人工催产到达效应时间后采用腹部挤压法采卵，收集后于16℃水温下，与上述灭活的史氏鲟精液，以1000粒卵:2ml灭活精液的比例，轻轻摇动混匀，其中精液使用量为0.2ml，然后加入20ml清水进行授精，授精水温16℃，授精时间2min，之后将授精后的受精卵用清水漂洗干净，再用20％的滑石粉悬浊液进行搅拌脱粘，此过程保持水温16℃；
(3)热休克诱导雌核发育
上述受精卵在16℃下受精后18min，将受精卵置于37℃的水浴中进行热休克，热休克时间2min，再将其移入16℃的水浴中复温；
(4)雌核发育诱导卵的培育
将上述经过热休克和复温后的受精卵继续脱粘，总脱粘时间45min，脱粘后的受精卵置于瓶式孵化器中孵化，孵化水温控制在16～18℃。
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