[发明专利]用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备

权利要求书

1.用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，包括：

(1)将体积比为9～12∶1的六氟异丙醇HFIP和甲酸混合液作为溶剂体系，混掺入反应容器内，温度为40～60℃，水浴振荡反应20～45min；

(2)将尼龙6和壳聚糖粉末在搅拌条件下缓慢加入上述反应容器内，继续搅拌2～3h至完全溶胀，其中尼龙6颗粒质量浓度为5～8wt％，壳聚糖的质量浓度为0～2wt％；

(3)将上述反应容器置于水浴振荡器内，在回流冷凝下，缓慢加热至40～60℃，振荡15h～30h至完全溶解，得尼龙6/壳聚糖纺丝液；

(4)用注射器抽取尼龙6/壳聚糖纺丝液，固定在静电纺丝装置上，调节纺丝参数进行电纺，静电压为10～18kv；接收屏采用铝箔接地接收，针头与接收屏的距离为10～20cm，得尼龙6/壳聚糖超细纳米纤维膜，然后干燥；

(5)将干燥后的尼龙6/壳聚糖纳米纤维膜切成圆形膜片，放入50～60℃，浓度为10～15wt％的NaOH溶液中活化20-30min；

(6)将上述纤维膜，用热水洗数次后，放入到染料溶液中反应；

(7)用20～30wt％的NaCl溶液在40℃～80℃水浴振荡处理20～45min，使染料吸附到尼龙6/壳聚糖纳米纤维膜上；

(8)调节水浴温度，用25～30wt％Na₂CO₃在60℃～90℃水浴振荡反应3～6h；

(9)冷却，洗涤，或保存于Tris-HCl缓冲液，得到以染料为配基的尼龙6/壳聚糖纳米纤维亲和膜。

2.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述步骤(1)六氟异丙醇HIFP的质量浓度为99％～100％，含水量小于0.1％。

3.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述步骤(4)中的注射器规格为5ml，针头内径约为0.4～0.7mm；喷出流速为0.5～2ml/h。

4.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述步骤(4)中的干燥方法是先将纺出的膜室温下干燥12h，然后放入烘箱中90℃干燥4～6h，最后放入真空干燥器中60～70℃干燥24h。

5.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述步骤(5)圆形膜片的直径为47mm。

6.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述步骤(6)染料为染料Cibacron Blue F3GA，浓度为5～15mg/ml。

7.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述步骤(9)中的洗涤是用40～50℃热水、含量为99.5～100％的甲醇、2～3M NaCl、3～6M尿素洗涤，洗涤程度是所洗后的洗涤液为无色。

8.根据权利要求1所述的用于快速高效分离纯化巯基蛋白酶的纳米复合亲和膜的制备，其特征在于：所述的纳米复合亲和膜应用于巯基蛋白酶的分离纯化。