[发明专利]一种检测胰腺癌血清标志物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学分子生物学技术领域，是一种检测胰腺癌血清标志物的方法，该胰腺癌血清标志物具体为microRNA-196a。

背景技术

microRNA最早发现于1993年，是一种小的、非编码蛋白质的单链RNA，由18～25个核苷酸组成。microRNA通过与mRNA3’非翻译区(3’UTR)结合，使得靶mRNA降解或抑制其翻译，实现其生物学功能。经过20多年艰苦卓绝的努力，科学家对microRNA研究取得了突破性进展，发现其在动物、植物和病毒中普遍存在，且在许多生命活动中起着非常重要的作用。根据最新的microRNA数据库统计(miRBase Registry 13.0)，人体已经发现了706种microRNA。microRNA具有高度的保守性、时序性和组织特异性。

近来研究表明，某些microRNA在细胞的分化发育中起着重要的作用，提示其与肿瘤的发生密切相关。通过特定的分子生物学技术(包括：Northern印记杂交、实时定量PCR，上调或下调特定microRNA的表达等)，人们发现microRNA表达量的变化与很多肿瘤密切相关，如：肺癌、乳腺癌、肝癌、结肠癌、白血病等。功能学研究显示：microRNA可能与癌基因或抑癌基因起着同样的作用。超过50％的microRNA基因位于肿瘤相关的基因组区域或者不稳定区域，这种现象提示，microRNA在部分肿瘤的发生过程中起着重要的作用。

尽管科学家们对于血液中DNA的研究已经有很长的历史，但对血液中RNA的研究仍处在初始阶段。由于循环血中RNA酶含量丰富，因此在其中检测到的RNA片段常被当做大片段RNA的降解片段。进来，多篇相关文献验证了循环血中miRNA的稳定存在，并探讨了循环血中microRNA对于疾病诊断及预后研究的巨大意义。(Chen X，Ba Y，Ma L，Cai X，et al.Cell Res.2008Oct；18(10)：997-1006.Mitchell PS，Parkin RK，Kroh EM，et al.Proc Natl Acad Sci U S A.2008Jul29；105(30)：10513-8.Gilad S，Meiri E，Yogev Y，et al.PLoS ONE.2008Sep5；3(9)：e3148.)

microRNA-196a(miRNA-196a)是一种进化上非常保守的microRNA(LaDeana W.Hillier，Webb Miller，Ewan Birney，et al.Nature.2004Dec9；432(7018)：695-716.)，在很多物种中广泛的存在(人类、小鼠、大鼠、蟾蜍、斑马鱼等)。有研究表明，miR-196a在细胞的分化发育中起着重要的作用，(QiuR，Liu Y，Wu JY，et al.Brain Res Bull.2009Apr 6；79(1)：26-31.Mansfield JH，HarfeBD，Nissen R，et al.Nat Genet.2004Oct；36(10)：1079-83.)已有研究证实：microRNA196a表达异常与许多肿瘤的发生发展密切相关，例如：miR-196a可以抑制ANXA1(一种肿瘤抑制蛋白，可以诱导凋亡，抑制细胞的增殖和迁移)的表达，从而促进食道癌，乳腺癌等的发生。(Luthra R，Singh RR，Luthra MG，et al.Oncogene.2008Nov 6；27(52)：6667-78.)SNP研究也表明：hsa-mir-196a与非小细胞肺癌的生存期密切相关。(Tian T，Shu Y，Chen J，et al.Cancer Epidemiol BiomarkersPrev.2009Apr；18(4)：1183-7.Hu Z，Chen J，Tian T，et al.J Clin Invest.2008Jul；118(7)：2600-8.)2008年，Charles等首先在弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者的血清中检测到microRNA-196a(miR-196a)，并证实其在DLBCL中的表达水平显著高于正常人，且与患者无复发生存期的长短密切相关。

胰腺癌恶性程度高，早期诊断困难，缺乏确实有效的方法，预后极差。手术切除是唯一可以延长生存期的治疗手段。不幸的是，绝大多数胰腺癌患者诊断时已属晚期(TNM分期III、IV期)，失去了手术机会。如果能寻找到胰腺癌特异的血清标志物，对胰腺癌的早期诊断和治疗方案的确定将具有极大的临床应用价值。

发明内容