[发明专利]抗心绞痛药物疗效检测

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体抗心绞痛药物疗效的试剂盒，通过检测抗心绞痛药物用药靶向位点ALDH2基因、CYP3A4基因、CYP3A5基因、CYP2D6基因和CYP2C9基因多态性位点来评估个体抗心绞痛药物疗效。

背景技术

心绞痛(angina pectoris)是冠状动脉供血不足，心肌急剧的、暂时缺血与缺氧所引起的临床综合征。其特点为阵发性的前胸压榨性疼痛感觉，可伴有其他症状，疼痛主要位于胸骨后部，可放射至心前区与左上肢，常发生于劳动或情绪激动时，持续数分钟，休息或用硝酸酯制剂后消失。本病多见于男性，多数病人在40岁以上，劳累、情绪激动、饱食、受寒、阴雨天气、急性循环衰竭等为常见的诱因。

rs671是位于ALDH2基因上的G/A多态，导致ALDH2基因编码的蛋白第504个氨基酸由Glu[E]变为Lys[K]。该位点多态在世界人群中的频率分布为G：0.935，A：0.065；在中国人群中的频率分布为G：0.844，A：0.156。李一峰、李青松等人对ALDH2多态E504K对硝酸甘油疗效和代谢的影响做了一系列的研究。说明了这个单核苷酸多态明显影响线粒体乙醛脱氢酶催化硝酸甘油生物转化的效率，并且可以部分解释中国人群中心绞痛患者对硝酸甘油的药物疗效差异的机制，但是对硝酸甘油清除性代谢的影响并不显著。

CYP3A4，5是重要的I相代谢酶，主要通过C-或N-脱烃、C-羟化等反应来代谢药物。参与约50％的药物代谢。心绞痛治疗常用药物钙通道阻滞剂(氨氯地平、地尔硫卓、硝苯地平、维拉帕米)，CYP3A4，5参与了代谢过程，并且处于主要代谢途径，此时酶活性的高低对药物药效及安全性的影响极大。因此，CYP3A4，5基因多态性导致的酶活性改变将在很大程度上反映抗心绞痛药物的用药效果，CYP3A4，5基因的分型检测对于临床抗心绞痛药物的用药指导具有的重要现实意义。

CYP3A4*18是目前已确定的CYP3A4SNP中等位基因突变率最高的位点，为外显子10上T878C突变，引起第293位亮氨酸(L)被脯氨酸(P)所取代。L293氨基酸残基被包裹在CYP3A4蛋白质的里面。由于L293P非组成性突变，影响了CYP3A4蛋白的构成，底物结合能力和酶催化活性。Gotoh证明了哺乳动物CYP450存在6种底物识别位点。根据这一结论，L293P就位于第4种底物识别位点，而这种位点在不同动物中是高度保守的，并与底物特异性相关。有研究认为该等位基因可能会提高CYP3A4酶活性，比如CYP3A4*18增加了对睾酮、氯螨硫磷的催化活性；因此有必要研究该位点对特定药物的影响。

CYP3A5的表达在人群中呈多态分布，它的功能仅在10～20％的白人，33％的东方人和55％的美国黑人中存在，这主要是因为CYP3A5*3突变导致了不适当的mRNA剪接，使终止密码子提前，导致CYP3A5缺乏。CYP3A5*3等位基因的发生频率的变化范围由50％(美国黑人)到90％(白人)。CYP3A5*3/*3纯合子的肝微粒体表达CYP3A5的水平很低，表现为咪达唑伦的代谢活性降低。CYP3A5*3/*3纯合子个体CYP3A5活性低于CYP3A5*3/*1杂合子，而CYP3A5*1/*1纯合子活性最高，表现出明显的基因剂量效应。CYP3A5*5、CYP3A5*6、CYP3A5*7也可形成可变剪切，从而导致编码的提前结束或外显子的丢失。

CYP2D6是重要的I相代谢酶，参与约25％临床常用药物的代谢，包括β受体阻滞剂、抗抑郁药物、抗精神病药物及化疗药物等。由于CYP2D6基因存在遗传多态性导致个体之间CYP2D6酶活性有差异，出现药物代谢能力的多态性，导致病人用药时很难获得最佳血药浓度，如血药浓度过低无法有效发挥药物疗效或浓度过高出现毒副作用。心绞痛治疗常用药物钙通道阻滞剂(维拉帕米、哌克昔林)β受体阻滞剂(烯丙洛尔、普萘洛尔、美托洛尔、噻吗洛尔)，CYP2D6都参与了代谢过程，并且对于某些药物2D6是主要代谢酶，此时酶活性的高低对药物药效及安全性的影响极大。因此，CYP2D6基因多态性导致的酶活性改变将在很大程度上反映抗心绞痛药物的用药效果，CYP2D6基因的分型检测对于临床抗心绞痛药物的用药指导具有的重要现实意义。

CYP2D6基因呈现高度多态性，目前已知有63种主要的等位基因，导致酶活性增加、降低或缺失。CYP2D6等位基因活性的改变是由于基因突变造成表达产物酶分子的改变，从而产生代谢缺陷。基因突变的主要方式是碱基缺失或替换引起读码框架移位，或者大片段基因的丢失。