[发明专利]一种高纯度灵芝多糖的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及药用真菌领域，具体地说涉及一种高纯度灵芝多糖的制备 方法。

背景技术

灵芝多糖是药用真菌灵芝中的主要药效成分之一，具有免疫调节和抗 肿瘤、抗衰老、抗高血压等活性，随着近年发现灵芝多糖有越来越多的生 物活性，各种灵芝多糖产品开始也越来越多，但因提取方式粗糙，精深加 工成本较高等原因导致其纯度均不高，加上消费者对产品的纯度、保健功 能、安全性和方便性的要求也在逐渐提高。

目前广泛采用的提取方法是水提法，提取之后的粗多糖产品中含有色 素、蛋白、小分子物质等不少杂质，使得多糖制品颜色较深且活性成分多 糖的含量不高，往往只能达到10％-20％。对灵芝多糖采用的脱色方法主要 有活性碳吸附和氧化两类，但是这两种方法往往会导致多糖的损失；脱蛋 白方法大多使用Savag法，该方法因为使用了大量的有机溶剂并且毒性较 大，且回收不便，成本较高，因而不适合规模化的处理。

发明内容

本发明提供了一种高纯度灵芝多糖的制备方法，解决了现有技术中的 缺陷。

本发明高纯度灵芝多糖的制备方法，包括如下步骤：

①水提法提取粗多糖；

将灵芝子实体粉碎成小块，按照1kg子实体：15-25L水的比例加水并 加热至沸腾，1-3小时，之后用滤布(100目)过滤，滤渣重复上述步骤再 提取1-2次后过滤，合并滤液，干燥。

②将粗多糖按0.5-2％的质量比配制成水溶液，加入木瓜蛋白酶，木瓜 蛋白酶的加入量为粗多糖的3％-5％(质量百分比)，于37-40℃，反应20-40 分钟；木瓜蛋白酶反应的作用是水解粗多糖中的蛋白。

③酶反应后的粗多糖溶液加入弱碱性阴离子树脂柱中进行处理，其中 粗多糖溶液与弱碱性阴离子树脂的比例为：1升粗多糖溶液∶1.5-2公斤树脂； 流速1-2ml/min；收集处理之后的流出液；这一步的作用是脱色和除去水解 后的蛋白。

④将收集到的流出液用1万分子量级别的中空纤维柱进行超滤，或用 1万分子量级别的透析膜进行透析处理；收集大于1万分子量的部分，浓 缩、干燥。

最终得到脱色并除去大部分蛋白及其他杂质的灵芝多糖产品。

本发明使用的灵芝菌种为赤芝，产自浙江龙泉；

本发明使用的蛋白酶为木瓜蛋白酶，购自北京鼎国生物技术有限公司。

本发明使用的弱碱性阴离子树脂可选自下述树脂：环氧骨架，功能基 团为-NH2，＝NH，≡N，＝N＝，具体如上海华震科技有限公司提供的335型 树脂。树脂在使用前最好先经过预处理，使其pH值为7-8。预处理方法如：

先用3％的盐酸浸泡4小时，之后用蒸馏水冲洗至中性；再用3％的 NaOH溶液浸泡4小时，之后用蒸馏水冲洗至pH7-8；

使用该方法制备的灵芝多糖的含量可达到50％以上，且多糖的活性也 比粗多糖要高。并且该方法操作要求简便易行，适合放大到规模化生产。

附图说明

图1工艺路线图

图2灵芝多糖可见光吸收曲线对比图

图3灵芝多糖免疫活性对比图

具体实施方式

实施例1

水提法制备灵芝子实体粗多糖。

将灵芝子实体经切片机切片并用粉碎机粉碎成小块，按照1kg子实体： 20L水的比例加水并加热至沸腾，沸腾持续2小时，之后用滤布(100目) 过滤，滤渣重复上述步骤再提取一次后过滤，合并两次提取的滤液，浓缩 之后进行喷雾干燥成粉末状。得到粗多糖。

实施例2

1.原料制备

实施例1的灵芝子实体粗多糖1克，按照1.5％质量比配制成水溶液， 离心除去沉淀部分。

2.蛋白酶处理

将木瓜蛋白酶按照粗多糖质量的3％的量加入粗多糖溶液中，于40℃， 反应半小时。

3.弱碱性阴离子树脂处理

弱碱性阴离子树脂预处理：用3％的盐酸浸泡4小时，之后用蒸馏水冲 洗至中性，再用3％的NaOH溶液浸泡4小时，之后用蒸馏水冲洗至pH7-8；