[发明专利]RBP4杂交瘤细胞株及其制备方法和用途无效
| 申请号： | 200910055427.0 | 申请日： | 2009-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN101967472A | 公开（公告）日： | 2011-02-09 |
| 发明（设计）人： | 孙兵;凌志洋;朱静嬿;吴洪强;唐琳娜;李炳南;史群芳 | 申请（专利权）人： | 上海中科英沐生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/06 | 分类号： | C12N15/06;C12N5/16;C12N5/20;C07K16/18;G01N33/577 |
| 代理公司： | 上海智鼎律师事务所 31248 | 代理人： | 沈其梅 |
| 地址： | 200233 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | rbp4 杂交瘤 细胞株 及其 制备 方法 用途 | ||
1.一种杂交瘤细胞株的制备方法，包括步骤：
(a)采用含有编码目的蛋白的多核苷酸的重组表达载体免疫动物；
(b)将该动物的脾细胞或淋巴结细胞与骨髓瘤细胞融合；
(c)筛选获得产生目的蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
2.权利要求1所述杂交瘤细胞株的制备方法，所述目的蛋白为RBP4蛋白。
3.权利要求1或2所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)重复2-3次。
4.权利要求2所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述重组表达载体为pBudCE4.1。
5.权利要求1或2所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述动物为大鼠、小鼠或大耳兔。
6.权利要求4所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述含有编码RBP4蛋白的多核苷酸的重组表达载体与佐剂混合后以肌肉注射方式免疫动物。
7.权利要求6所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述含有编码RBP4蛋白的多核苷酸的重组表达载体与佐剂的质量比为3∶1到1∶1。
8.权利要求6或7所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述步骤(a)中在肌肉注射后在注射部位做电穿孔。
9.权利要求8所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，在实施所述步骤(b)前先进行回忆刺激。
10.权利要求9所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)中将免疫后小鼠的脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞SP2/0采用聚乙二醇(PEG)常规融合法融合。
11.权利要求9或10所述杂交瘤细胞株的制备方法，其特征在于，所述步骤(c)中加HAT选择性培养基，以纯化的天然RBP4蛋白为抗原，采用ELISA法筛选RBP4杂交瘤细胞株。
12.一种按照权利要求1所述杂交瘤细胞株的制备方法制备得到的杂交瘤细胞株。
13.一种按照权利要求2所述杂交瘤细胞株的制备方法制备得到的RBP4杂交瘤细胞株。
14.权利要求13所述RBP4杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株的保藏号为CCTCCNO：-C200946或CCTCC NO：-C200951。
15.权利要求13所述RBP4杂交瘤细胞株分泌的RBP4单克隆抗体。
16.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括至少一种权利要求15所述的单克隆抗体。
17.权利要求16所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标记或显色剂。
18.权利要求15所述RBP4单克隆抗体在制备检测RBP4蛋白的试剂盒中的应用。
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