[发明专利]3＇-sulfo-Lea抗原在制备检测肿瘤试剂中的用途

说明书

技术领域

本发明属生物分子学领域，涉及3′-sulfo-Lea抗原在制备检测肿瘤试剂中的用途。

背景技术

据报道，胃癌(GC)是世界上最常见的恶性肿瘤，手术后的5年生存率在10％-30％。早期发现和根治性手术切除是提高治愈率的关键。大肠癌是西方国家主要的死亡原因之一，据世界卫生组织的统计，2000年，全世界新发病例数超过800,000人，每年因大肠癌死亡的人数超过500,000人。术后5年生存率，在早期是80％，晚期只有40％，因此，早期发现对于提高大肠癌的预后显得尤为重要。

肿瘤细胞生物化学的改变反映其与正常细胞生长、繁殖、代谢功能的不同，对于肿瘤的诊断、鉴别诊断和预后判断有重要意义。研究报道，新陈代谢结果使肿瘤细胞表面糖蛋白和糖脂发生某些变化，该改变与肿瘤预后有关系。磺酰化的糖链可存在于很多生物大分子上，包括糖蛋白、糖脂、蛋白聚糖、多糖。磺酰化的糖复合物在细胞黏附、炎症、肿瘤的转移等许多生物过程中发挥重要的作用。磺酰化的半乳糖糖链的合成需要在半乳糖磺酰基转移酶的催化下，将供体PAPS(3′-phosphate5′-phosphosulfate)上的活性磺酰基转移到I型或II型糖链外侧的半乳糖基3位羟基上，形成磺酰化的半乳糖结构，还可进一步在岩藻糖基转移酶的催化下，合成sulfo-Lewis抗原。在已经克隆出的磺酰基转移酶当中，GP3ST被认为是参与3′-sulfo-Lewis抗原合成的关键的酶。

已知，磺酰化半乳糖残基结构可存在于O-连接的分泌型或膜结合型高分子质量粘蛋白的外侧糖链上，有研究表明磺酰化的黏蛋白在消化道中主要表达在结肠，而在正常胃黏膜没有表达。有研究发现，大肠硫黏蛋白的表达量在大肠致癌过程中下降；大肠腺癌组织3′-Sulfo-lea抗原的表达与癌旁组织和正常组织相比都明显降低，降低的程度与肿瘤侵袭程度成正相关；磺酰化的黏蛋白的表达量随着肿瘤浸润深度的增加而逐渐下降。又有研究发现，高表达3′-Sulfo-lea抗原的大肠癌细胞表现为较低的裸鼠种植成瘤率以及磺酰基转移酶活性的下降。与大肠癌相反，原本不表达磺酰化黏蛋白的胃粘膜在形成肿瘤后出现磺酰化黏蛋白的表达。

很显然，从上述研究中，可以得出一个结论：磺酰化蛋白与肿瘤转移之间存在一定的关系，但是其中机制目前尚不清楚。即便如此，转移过程中的硫黏蛋白表达的变化对评估肿瘤预后具有一定的意义。

GP3ST是参与3′-sulfo-lea抗原合成的主要的酶，它分布广泛，尤其在大肠组织。3′-O磺酰化的半乳糖基既可存在于O型糖链，也可存在于N型糖链，因此3′-sulfo-lea抗原表位的核心分子可以是除了黏蛋白之外的其他分子，异常表达的GP3ST可能导致这些分子的磺酰化修饰异常。血清中3′-sulfo-lea抗原的变化迄今尚未见有报道。

发明内容

本发明的目的是提供含有sulfo基团的蛋白质(以下称：3′-sulfo-Lea抗原)的新用途，尤其涉及3′-sulfo-lea抗原在制备检测肿瘤试剂中的用途。

本发明利用RNAi的方法，下调了人胃腺癌细胞SCG7901的GP3ST表达，从而间接下调其底物的3′-O磺酰化水平，而后观察细胞生物学行为的变化，分析3′-O磺酰化的半乳糖链肿瘤转移中作用的可能机制；用化疗药物5-FU以及抗肿瘤药物ATRP(维甲酰脯酰胺)作用于人胃腺癌细胞SCG7901，通过ELISA的方法检测药物作用后细胞3′-Sulfo-Lea抗原的表达的变化，确定3′-Sulfo-Lea抗原的临床应用的新用途。

本发明通过酶联免疫吸附试验检测血清3′-sulfo-Lea抗原水平；并进一步验证3′-sulfo-Lea抗原与肿瘤发展的关系，应用RNAi技术下调合成3′-sulfo-Lea抗原的酶GP3ST(半乳糖磺酰基转移酶)，通过琼脂滴迁移试验观察人胃腺癌细胞SCG7901迁移能力的变化、通过细胞与脐静脉内皮细胞和人sL-选凝蛋白的黏附实验观察细胞黏附能力的变化；应用化疗药物5-FU和抗肿瘤药物ATRP(维甲酰脯酰胺)以浓度和时间梯度作用于人胃腺癌细胞，再通过酶联免疫吸附试验检测全细胞裂解液中3′-sulfo-Lea抗原的表达水平的变化，检测结果，可为临床将3′-sulfo-Lea抗原作为临床肿瘤化疗疗效监测指标提供依据。