[发明专利]检测血液抗环瓜氨酸多肽抗体的试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医学免疫应用领域，具体涉及到利用胶体金免疫层析技术检测抗环瓜氨酸肽抗体的试纸条及其制备方法。

背景技术

类风湿性关节炎又称类风关(RA)，RA是一种以关节组织或关节翳的异常生长而引起的慢性多关节损伤为特征的系统炎症性疾病，导致无规则的关节丧失功能。最近的研究显示RA患者的关节损伤出现在疾病开始两年后，早期有效治疗可以预防这一疾病的随后进展。因此，早期诊断和早期治疗已成为重点。然而，RA患者在疾病早期并不总是显示出典型的症状和现象，因为它们可能并不完全符合RA诊断标准，这就使得诊断变得困难起来。RA因RF对应的IgG Fc段的自身抗体，以及其他抗体的出现而被划分为系统性自身免疫性疾病中，迄今，RF是应用于临床的RA唯一血清学标志物。然而RF在RA中的敏感性在60-80％之间，其特异性也相当低，因为RF在其他疾病中也可以被广泛而频繁地识别出来，包括各种结缔组织疾病，慢性肝脏疾病和感染性疾病，甚至少数健康人群当中。因此RF被应用于RA的诊断标准，然而它的早期诊断价值并不令人满意。

最近几年，几个新的抗体已在RA患者中被发现，其临床特点和可能的病理角色也已经呈现出来。特别是新的抗瓜氨酸蛋白自身抗体如filaggrin和它的环化形式(即环瓜氨酸肽：CCP)在RA患者中可以接受的敏感性和高度的特异性而备受关注，因此成为早期诊断的标志物和关节损伤的前兆因子。最近研究已证实RA患者不但产生RF因子也会有其他各种不同的抗体。尽管大多数抗体对于RA并非特异的，但瓜氨酸蛋白自身抗体(APF、AKA、抗filaggrin抗体、抗CCP抗体和抗Sa抗体)仅在RA中被识别出来，抗CCP抗体因其高度的敏感性和特异性尤其引起关注。抗CCP抗体是诊断RA，特别是早期RA的首选指标，适用于难以确诊的RA和需鉴别诊断RA及其他炎症性关节炎和其他形式的多关节炎的诊断，同时可以确认血清学RF阴性的RA。具体表现在以下四个方面：1.抗CCP抗体对临床诊断RA的准确性：特异性95％，敏感性80％[1]；2.抗CCP抗体可在多数首次就诊的RA患者检出-出现在早期RA患者[2]；3.抗CCP抗体滴度与疾病活动性相关-预示转归[3]；4.持续监测抗CCP抗体作为早期RA侵蚀性的进展指标[4]。

目前抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的检测方法为酶联免疫吸附法(ELISA)，目前市场上商品化抗CCP抗体检测试剂盒主要为ELISA试剂盒。ELISA法操作程序烦琐，完成整个实验过程需三小时左右，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，并且需经酶标仪检测后读取实验结果，这在基层医疗机构的实验室和小型门诊中较难实现该项目的实验检测，同时基于ELISA方法学易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。

胶体金免疫层析法(gold-immunochromatography assay，GICA)是应用胶体金标记技术，以胶体金作为示踪物，以条状纤维层析材料为固相，通过毛细效应使样品溶液在层析条上泳动，使样品中的待测物与结合垫上胶体金标记物发生免疫反应，并与条状纤维层析材料上的抗原(或抗体)发生免疫反应而被截留，进而形成肉眼可见的紫红色条带，得到直观的实验结果，达到快速检测的目的[5]。使用时只需要把样品加样到试纸条的样品垫上，数分钟就根据检测线上紫红色条带出现与否来判断阴阳性结果。与其他检测方法相比，稳定性好，操作人员无需培训，操作简便、快速，无需低温保存，储运方便。

目前尚未有检测抗CCP抗体胶体金免疫层析法检测用试纸条。本发明将环瓜氨酸肽引入到试纸条中，实现了高特异性、高灵敏度、高准确度的检测性能。判读结果简便，仅需数分钟；为快速筛选RA实现早期诊断早期治疗提供条件；满足基层实验室、即时检测、床边检测的需求。

相比上述优点，现有的检测抗环瓜氨酸肽抗体的方法存在如下不足之处：

1.检测步骤烦琐，检测时间长；

2.检测试剂需要冷藏运输和保存；

3.检测需要特殊的仪器设备。例如，ELISA法需要酶标仪；

4.不适合单人份操作，对于ELISA法需同时做标准品和阴阳性对照品，多人份同时检测才能节省检测成本。

发明内容

本发明为了克服以上方法学的不足，将胶体金层析法应用到抗环瓜氨酸肽抗体的检测中，同时首次将环瓜氨酸肽应用到胶体金层析法中，采用间接法来实现血浆以及血清样本中的抗环瓜氨酸肽抗体的检测，大大降低了经济成本，实现高特异性、高灵敏度、高准确性的检测性能，能快速、便捷地辅助诊断早期类风湿关节炎(RA)。