[发明专利]乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及其应用方法

说明书

技术领域

本发明属医学领域，涉及乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及慢性乙肝患者使用阿德福韦抗病毒治疗后耐药情况的临床监测。

背景技术

阿德福韦酯(adefovir dipivoxil，ADV)是开环嘌呤类核苷酸类似物，不仅对慢性乙型肝炎患者有较好的疗效，对阿德福韦耐药的HBV也有较好的抑制作用，已被广泛应用于慢性乙型肝炎患者(包括阿德福韦耐药患者)的治疗。尽管HBV对阿德福韦耐药的发生率低于拉米夫定，但长期服用仍有较高的耐药率，对于初治的患者，ADV治疗5年的耐药率分别为0，2％～3％，5.9％～11％，18％，28％；对于LAM治疗失败后换用ADV单药治疗的患者，ADV的耐药率更高，1～2年的耐药率分别为6.4％～17.5％和25.4％。目前已证实ADV耐药相关的变异主要包括有两种：rtA181V/T/S和rtN236T。对于阿德福韦耐药变异的检测，除了DNA测序分析之外，国外报道可使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)、INNO-LiPA探针检测法、PCR及固相杂交等方法。测序分析方法需要昂贵的测序仪，检测过程耗时较长，且只有当病毒群中HBV变异株至少占30％以上时(通常需50％以上)，才能检测到变异株，用于变异株检测有较大的局限性；基于PCR的方法可能一次只能检测一种类型的变异；而RFLP方法只能判断有无变异，具体的点突变的情况无法检测；INNO-LiPA探针检测法虽然灵敏度较高，但检测成本较高，且操作复杂耗时，检测通量较低，同时价格昂贵，应用受到限制，难以在我国推广应用。为了适应我国的国情，满足医疗、科研的需要，急需建立快速、简便的、高度敏感性和特异性的高通量检测阿德福韦变异株的方法。

对于LAM耐药相关性变异的检测，除了DNA测序分析之外，国外报道可使用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)、INNO-LiPA探针检测法、特异性PCR及固相芯片等方法。测序分析方法需要昂贵的测序仪，检测过程耗时较长，且只有当病毒群中HBV变异株至少占30％以上时(通常需50％以上)，才能检测到变异株，用于变异株的早期检测有较大的局限性；基于PCR-RFLP的方法可能一次只能检测一种类型的变异；而INNO-LiPA探针检测法虽然灵敏度较高，但检测成本较高，且操作复杂耗时，检测通量较低，同时价格昂贵，推广应用受到限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针及相应的乙肝病毒阿德福韦相关变异应用检测方法。

本发明提供了一种乙肝病毒阿德福韦耐药变异株的检测探针，该检测探针可以是SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO10、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12、SEQ ID NO 13、SEQ ID NO 14、SEQ IDNO 15、SEQID NO 16、SEQID NO 17、SEQ ID NO 18或者SEQ ID NO 19中的一种或者几种。

较好的，该探针由SEQ ID NO 6、SEQID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ IDNO 9、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12或者SEQ ID NO 13中的一种或者几种，以及SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 16、SEQID NO 17、SEQ ID NO 18或者SEQ ID NO 19中的一种或者几种组成。

将序列如SEQ ID NO 6、SEQ ID NO 7、SEQ ID NO 8、SEQ ID NO 9、SEQ ID NO 10、SEQ ID NO 11、SEQ ID NO 12或者SEQ ID NO 13中的一种寡聚核苷酸分子与序列如SEQ ID NO 14、SEQ ID NO 15、SEQ ID NO 16、SEQ ID NO 17、SEQ ID NO 18或者SEQ ID NO 19所示的一种寡聚核苷酸分子组合，进行检测可同时获得两个耐药性位点的测试结果，能够更准确地获得样本的阿德福韦耐药性特征。