[发明专利]一种PTEN基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种PTEN基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

癌症也叫恶性肿瘤。肿瘤是指机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增生而形成的局部肿块。良性肿瘤容易清除干净，一般不转移、不复发，对器官、组织只有挤压和阻塞作用。但恶性肿瘤还可以破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，患者最终可能由于器官功能衰竭而死亡。

癌症病变的基本单位是癌细胞。人体细胞老化死亡后会有新生细胞取代它，以维持机体功能。可见，人体绝大部分细胞都可以增生，但这种增生是有限度的，而癌细胞的增生则是无止境的，这使患者体内的营养物质被大量消耗。同时，癌细胞还能释放出多种毒素，使人体产生一系列症状。如果发现和治疗不及时，它还可转移到全身各处生长繁殖，最后导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热及脏器功能受损等。

有人用免疫组化SP法检测30例正常子宫内膜组织、32例单纯型增生过长、31例复杂型增生过长、36例不典型增生、64例子宫内膜癌组织中Rb2/p130和PTEN，KI-67的表达。结果Rb2/p130和PTEN蛋白在正常子宫内膜组织、单纯型增生过长、复杂型增生过长、不典型增生、子宫内膜癌组织中的阳性表达依次递减，而KI-67的阳性表达率依次递增，子宫内膜癌和不典型增生中Rb2/p130和PTEN阳性表达率明显低于正常增生期子宫和单纯性增生，差异均有显著性(P均，＜0.01)，以上三基因的表达与癌症的临床病理分型有关。近来的研究发现PTEN基因即第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten.PTEN)，是1997年由STECK等研究发现的一种具有磷酸酶活性的抑癌基因，又称作MMAC1(muted in multiple advanced cancers)或TEP1，这个基因位于染色体10q23.3”上，全长2095bp。目前研究发现PTEN基因在细胞调亡迁移和肿瘤发生、发展中有一定作用。近期发现即使由细胞正常产生的PTEN也需要定位在细胞核中，以保证完全的肿瘤抑制功能。目全的研究证明在不同类型的癌症中，PTEN都会离开细胞核，通过对急性髓系白血病中异常的血细胞进行分析发现，其中PTEN从细胞核中逃离出来，从中观察到了另一种肿瘤抑制因子PML，PML是造成急性髓系白血病的主要原因之一，PML因子的丢失是造成PTEN从细胞中逃离的根源。通过进一步研究发现PML因子阻遇了一种称为HAUSP酶的活性，这种酶能在正常情况下将PTEN导向细胞外。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到基因水平的早期预测诊断。采用核酸原位杂交技术检测PTEN基因比检测PTEN蛋白要敏感多，而且，能更早的时间内检测到癌症的发生与PTEN基因相关。PTEN基因序列号NM-000314，CDS：1032…2243。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种PTEN基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种PTEN基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种PTEN基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种PTEN基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。