[发明专利]一种ABCA5基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种ABCA5基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

前列腺肉瘤是前列腺部位恶性肿瘤的一种，与前列腺癌又有所不同。前列腺癌主要发生于前列腺上皮细胞，而前列腺肉瘤则发生于前列腺间质。

前列腺肉瘤占前列腺恶性肿瘤的0.1％，来自中胚叶，经不同程度分化可形成各种类型肉瘤。常见的有横纹肌肉瘤、平滑肌肉瘤、纤维肉瘤，此外还有淋巴肉瘤、粘液肉瘤、血管肉瘤、软骨肉瘤等，但比较少见。横纹肌肉瘤多见于小儿，平滑肌肉瘤多见于成人。

前列腺肉瘤是一种少见的前列腺部恶性肿瘤，它在前列腺恶性肿瘤中所占的比例在我国为2.7％～7.5％，而在西方发达国家为0.1％～0.3％。这种差异可能与西方国家前列腺癌比例高，而我国前列腺癌发病率低有关。

前列腺肉瘤在任何年龄均可发病，但多见于青年人及儿童，约30％发生于10岁以内，75％发生于40岁以内。据上海18家医院统计，1959年至1979年20年间，共发现前列腺肉瘤7例，其中6例的年龄为24～37岁，另外1例的年龄为62岁。本病发病率虽不高，但肿瘤生长迅速，预后不良。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到基因水平的早期预测诊断。采用核酸原位杂交技术，对ABCA5基因进行检测，有助更早期的发现前列腺肉瘤。ABCA5基因是前列腺肉瘤标志物，序列号NM-018672 mRNA CDS：1219…..6147bp。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种ABCA5基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种ABCA5基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种ABCA5基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种ABCA5基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测前列腺肉瘤疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。

所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种ABCA5基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种ABCA5基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤：

a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；

b、检测a步骤得到的杂交复合体。

所述的a步骤中形成杂交复合体的条件为：核酸杂交的温度为42℃；核酸杂交的时间为16-24小时，所述的底物选用血液细胞标本或组织细胞标本。

本发明的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括：

仪器操作：

1).将待测标本放入反应槽中；

2).仪器自动弃去液体，自动加消化液；

3).仪器自动弃去液体，自动后固定；

4).仪器自动弃去液体，自动预杂交(42℃)；