[发明专利]一种Spink1基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种Spink1基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

前列腺癌(prostatic carcinoma，prostatic cancer)是男性生殖系最常见的恶性肿瘤，发病随年龄而增长，其发病率有明显的地区差异，西欧和北美地区已高过肺癌，在男性是癌症死亡的第1位。我国以前发病率较低，但由于人口老龄化，近年来发病率有所增加，从1993年的每10万人的发病率1.7上升到2000年的10万分之4.55，到2005年上升到7.9。虽然这一发病率与其他肿瘤相比还相对较低，但对于城市男性来说，前列腺癌的发病率已在所有肿瘤中居第十位，应引起高度关注。前列腺癌的发病与年龄呈正相关：据国外统计，50岁以下男性很少发生，50～60岁发病占前列腺癌的1/3，70岁以上约占1/2，80岁以上约占3/4。前列腺癌的病因目前尚不完全清楚，大量临床研究提示，前列腺癌与性激素有关，特别是雄性激素与前列腺癌的发病存在非常明显的因果关系。雄性激素高的人群前列腺癌的发病，要比雄性激素低的人群高；而通过辠丸切除或各种药物减少雄性激素的合成，阻断雄性激素的作用可以达到治疗前列腺癌的目的。专家介绍说，前列腺癌与遗传有关，直系亲属中如果有前列腺癌的，其本人患前列腺癌的风险要比其他人高一倍。目前大家比较公认的是，前列腺癌与种族有关，前列腺癌在黑人中更为常见。也有研究提示，环境污染、淋球菌感染、前列腺增生、过量饮用咖啡和酒类等也与前列腺癌发生有关。此外，前列腺癌与饮食有关，长期高脂肪、高蛋白饮食与前列腺癌高度相关。专家介绍说，在2007年美国泌尿外科年会上，与会学者在讨论预防前列腺癌何种饮食最好时，大家得出的结论是中餐最好。传统中餐的特点是新鲜蔬菜多，肉食相对较少，还配有米饭和面条等主食，是一个合理的饮食结构。有专家认为，之所以欧美前列腺癌成为男性泌尿系统发病率最高的肿瘤，其中一个重要的原因就是与西餐的饮食结构有关。

由于前列腺癌在早期没有任何症状，患者往往容易错过最佳的治疗时机，导致诊疗难度加大。其实前列腺疾病是一种非常普通的男性疾病，发现得越早，治疗效果就越好。在大型义诊咨询活动中，北京大学第三医院为100位老年男性提供了免费的前列腺特异性抗原(PSA)检查。PSA是前列腺腺体和导管细胞分泌的一种蛋白质，正常时血中含量很少。一旦患有前列腺癌，PSA值将升高。PSA是目前公认有效的前列腺癌早期诊断方法，它可以敏感地确定前列腺癌的发生。由美国和瑞典科研人员进行的研究显示，男性在50岁之前进行PSA检测，可以提前25年预测前列腺癌的发生。与通常的直肠指诊、直肠超声检查比较，PSA具有测定结果客观、定量、无昼夜变化、不受检查者技术影响，以及测定方法更易为患者接受等优点。在多数情况下，PSA检测可以在前列腺发病初期就发现肿瘤，使更多的前列腺癌患者获得根治性手术的机会，提高肿瘤的治愈率。近来PSA的诊断准确率受到愈来愈多文献的探讨，以往人们一直用前列腺特异性抗原(PSA)作为前列腺癌(Pca)的标志物，但是PSA缺乏特异性，在良性前列腺增生(BPH)时PSA也会增高。尤其是PSA在4～10ng/L范围内，就很难区分BPH和Pca。因此，寻找更有临床意义的诊断指标非常迫切。

前列腺癌从癌前变到形成癌症，需要几年时间，如何做到早期检测、诊断、预后的检测及诊治后的复发、转移早期检出是降低发病率和死亡率的关键。

密西根州立大学的健康系统研究中心的病理学研究者发现在10％的前列腺癌症患者中有过度表达类型，聚焦于前列腺癌与基因融合的关系上，研究者在最近的研究中对1800例前列腺癌患者进行遗传性分析，寻找患者共同基因特征，他们发现一个叫Spink1(serine peptidase inhibitor，Kazal type 1)基因过度表达，或是未出现基因融合的前列腺癌中有大量基因拷贝.研究表明Spink1是亚型前列腺癌症的分子标记物，它是一种存在于体液、血液和组织中的分子物质，Spink1高表达病患比其它类型前列腺癌具有更大复发几率。Spink1基因序列号NM-003122mRNA，454bp cds：121……360bp。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到基因水平的早期预测诊断。本发明采用核酸原位杂交技术检测Spink1基因，对前列腺癌的早期基因水平的预测有临床价值。