[发明专利]一种EGFR基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种EGFR基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

癌症也叫恶性肿瘤，肿瘤是指机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增生而形成的局部肿块。癌症病变的基本单位是癌细胞。人体细胞老化死亡后会有新生细胞取代它，以维持机体功能，人体绝大部分细胞都可以增生，但这种增生是有限度的，而癌细胞的增生则是无止境的，这使患者体内的营养物质被大量消耗。同时，癌细胞还能释放出多种毒素，使人体产生一系列症状，晚期时它转移到全身各处生长繁殖，最后导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热及脏器功能受损等，器官功能衰竭而死亡。

EGFR表皮生长因子受体，在生理状态下是细胞生长的调节因子，与其配体如EGF、TGF-α结合后发挥其生理效应，可启动细胞生长周期，即通过一系列细胞内传递体将生长信号传导至核内引起细胞的生长反应，调节细胞的分裂、分化和增殖。在恶性肿瘤中，EGFR过度表达，持续向细胞内传递分裂增殖信号，干扰细胞分化的正常调控状态，引起细胞持续增殖，发生恶性转化。细胞系的实验研究对成釉细胞瘤细胞表面的表皮生长因子受体(ECFR)和C-erbB-2等生长因子受体进行了检测，发现肿瘤细胞表面的EGFR和C-erbB-2的阳性率分别为(42.20±3.42)％和(57.03±5.06)％。肿瘤生长和发展过程中，体内微环境对肿瘤细胞的分裂增殖具有重要意义，微环境和肿瘤细胞之间可通过自分泌、旁分泌和内分泌等方式产生的多种信号因子，单独或联合调控肿瘤细胞的增殖生长。C-erbB-2与EGFR的结构相似，已有实验证明在肺癌和黑色素瘤患者中EGFR阳性细胞的转移和继发生长能力都强于EGFR阴性的细胞亚群。实验中近半数的肿瘤细胞表面存在EGFR和C-erbB-2等生长因子受体，推测成釉细胞瘤本身分泌的生长因子和细胞表面的生长因子受体可能在肿瘤细胞体内增殖和侵袭等过程中起重要作用。有大量文献报道EGFR基因各种癌症发病有关，EGFR基因表达变化明显增加。在肺癌、胰腺癌和结直肠癌等多种肿瘤患者的外周血中可以检测到表皮生长因子受体(EGFR)的表达。肺癌和良性疾病之间外周血血清EGFR水平无差别，但在伴有淋巴结转移的肺癌中的表达与无转移组之间差别显著，血清EGFR水平可作为肺癌淋巴结转移的指标。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到基因水平的早期预测诊断。采用核酸原位杂交技术检测Egfr基因的表达量，对临床各种类型癌症的早期基因水平的诊断有非常重要的临床意义。EGFR基因序列号：NM_005228，5616bp，mRNA，7p12″CDS：247……3879bp。

本发明的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种EGFR基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种EGFR基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种EGFR基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种EGFR基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的疾病是肾癌，胰腺癌，结直肠癌或肺癌。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。

所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：