[发明专利]一种Heparinase基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种Heparinase基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1、肿瘤细胞异质性；2、肿瘤细胞耐药性；3、抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：1、不能做到真正的早期诊断；2、转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一临床概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

肝素酶，近年来许多研究小组发现肝素酶(heparinase)可促进肿瘤细胞扩散和转移，并进行了肝素酶蛋白的纯化、抗体制备及其基因的克隆。还发现肝素酶抑制剂可明显抑制肿瘤细胞的扩散与转移。通过载体将heparinasecDNA分别导入无转移潜力的小鼠淋巴瘤细胞系和低转移潜力的黑素瘤细胞系，结果转染细胞均有高水平肝素酶表达，并获得高转移潜能。经裸鼠静脉接种后，大体标本和显微镜检查均发现转染组有明显肝转移灶，而假转染组仅镜检才发现肝窦等处有癌细胞，至4周时，对照组所有小鼠均存活，而实验组已有50％死亡，其中90％死于转染后34天以内，因此认为肝素酶可促进肿瘤细胞扩散和转移。进一步实验检测发现高转移潜能的恶性肿瘤细胞肝素酶表达水平较高，而低或无转移潜力的肿瘤细胞无或仅有少量表达。近期，更多文献证实了肝素酶在胃癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌及非小细胞肺癌等恶性肿瘤侵袭转移中的重要作用。Heparinase(肝素酶)基因，1379bp，DNA，cds：173…1327bp。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。本发采用核酸原位杂交技术检测Heparinase基因，对癌细胞的早期转移有非常重要的临床意义。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种Heparinase基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种Heparinase基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种Heparinase基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种Heparinase基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症早期转移、复发疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的癌症是肝癌、胃癌、前列腺癌、宫颈癌或子宫内膜癌。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。