[发明专利]一种PD-ECGF基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种PD-ECGF基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1、肿瘤细胞异质性；2、肿瘤细胞耐药性；3、抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：1、不能做到真正的早期诊断；2、转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一临床概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

血小板衍生内皮细胞生长因子(platelet derived endothelial cell growth factor，PD-ECGF)最早从新鲜血小板溶解物中提取，其后证实与胸苷磷酸化酶(TP)是同一种物质，其基因位于染色体22q13″。PD-ECGF在肝癌组织中表达率达67.8％～70.5％，高于癌周正常肝组织，且在TNM高分期组肝癌中表达高于TNM低分期组；伴有门静脉癌栓的肝细胞癌中，PD-ECGF表达水平高于不伴有门静脉癌栓者，提示PD-ECGF可能与肝癌生长和侵袭转移中的血管生成有关，PD-ECGF水平可作为肝癌转移复发的预测指标。Volm等用免疫组化方法研究了168例非小细胞肺癌组织中PD-ECGF、bFGF和VEGF的表达，发现3个指标均阴性的患者中43％有淋巴结转移，而3个指标均阳性的患者中77％发生淋巴结转移，两组存在显著差异。在mRNA水平、蛋白质表达和酶活性分析中都证实了PD-ECGF在膀胱癌等肿瘤的恶性进展中起着重要作用。PD-ECGFmRNA表达越高，局部浸润范围越广，越容易出现淋巴结或远处转移，预后越差。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。采用核酸原位杂交技术检测PD-ECGF基因，对癌症的早期基因水平的转移诊断有非常重要的临床意义。PD-ECGF(血小板衍生内皮细胞生长因子)基因，基因序列号：NM_001014440，970bp，mRNA.22q13.33″，CDS：138…899bp。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种PD-ECGF基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种PD-ECGF基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种PD-ECGF基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种PD-ECGF基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症早期转移、复发疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的癌症是肝癌或膀胱癌。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。