[发明专利]一种PLAU基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种PLAU基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用。

【背景技术】

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1、肿瘤细胞异质性；2、肿瘤细胞耐药性；3、抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：1、不能做到真正的早期诊断；2、转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一临床概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

尿激酶型纤溶酶原激活物系统，它的组成包括尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasminogen activator，uPA或PLAU尿激酶基因)。研究证明肿瘤细胞分泌的uPA原被血浆中的组织蛋白B激活为双链有活性的uPA，后者激活纤溶酶原转化为纤溶酶。而生成的纤溶酶又反馈激活uPA原转化为有活性的双链uPA，产生较多有活性的uPA，继而再激活纤溶酶原形成更多的纤溶酶，以适应肿瘤细胞侵袭、转移的需要。已有大量研究表明，uPA及其受体uPAR表达水平与多种肿瘤的恶性程度、预后及侵袭转移能力密切相关，可作为肿瘤侵袭转移的预测指标。Kaneko等发现，在胃癌中uPA的表达和肿瘤浸润深度、肿瘤细胞分化、胃癌淋巴血管侵犯及微血管密度(MVD)相关，uPAR的表达与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移肿瘤细胞分化及血管侵犯相关，经多因素分析显示，胃癌中uPA的表达可作为胃癌的预后指标。PLAU(尿激酶)基因，NM_002658，2395bp，mRNA，10q24″，cds：147…1442bp。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。本发明采用核酸原为杂交技术检测UPA基因的表达量来诊断临床各类癌症，有非常重要临床价值。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种PLAU基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种PLAU基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种PLAU基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种PLAU基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症早期转移、复发疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的癌症是胃癌。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。