[发明专利]一种CHIP基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种CHIP基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10％，在妇女仅次于子宫癌。它的发病常与遗传有关，以及40-60岁之间，绝经期前后的妇女发病率较高。仅约1-2％的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一，

乳腺癌从癌前变到形成癌症，需要几年时间，如何做到早期检测、诊断、预后的检测及诊治后的复发、转移早期检出是降低发病率和死亡率的关键。

日本筑波大学一个研究小组发现，人体细胞中的蛋白质“CHIP”可以抑制乳腺癌细胞增殖和转移。这一成果2月9日发表在英国《自然-细胞生物学》(Nature Cell Biology)杂志网络版上。研究人员说，他们注意到，在人体细胞中，蛋白质“CHIP”的水平随着乳腺癌的发展而降低，用实验鼠进一步研究发现，减少“CHIP”的量，实验鼠乳腺癌细胞形成大块肿瘤，且转移加快；增加“CHIP”的量，乳腺癌细胞增殖和转移能力则受到极大的抑制。研究人员说，这一发现表明，可以通过提高“CHIP”蛋白质的量或促使其活跃来抑制乳腺癌细胞的增殖和转移。这项成果为开发防治乳腺癌新药提供了思路。此外，由于“CHIP”蛋白质也存在于乳腺以外的组织，研究人员推测，它可能还能抑制其他癌症细胞的增殖和转移。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。本发明采用核酸原位杂交技术检测CHIP基因的表达量，对乳腺癌的基因水平的早期诊断有非常重要的临床价值。CHIP基因序列号：NM-005861，1646bp，CDS：412…1323bp，在染色体16p13.3″。

本发明的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种CHIP基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种CHIP基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种CHIP基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种CHIP基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。

所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种CHIP基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种CHIP基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤：

a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；

b、检测a步骤得到的杂交复合体。

本发明的诊断试剂盒的组份是由杂交探针，杂交液，显色剂，增效剂等组成。本试剂盒的核酸杂交原理是分子生物学业内人士均熟知，具体操作步骤是标本处理、预杂交、杂交、免疫组化染色、镜下进行定量分析、结果报告，其中杂交的具体步骤包括：

仪器操作：

1).将待测标本放入反应槽中；

2).仪器自动弃去液体，自动加消化液；

3).仪器自动弃去液体，自动后固定；