[发明专利]一种ALDH1基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种ALDH1基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用。

【背景技术】

根据国内外权威机构提供的资料，我国每年癌症的新增人数160万，死亡人数近160万，患者600万，全球每年新增癌症患者800万，死亡人数接近800万，患者约有8400万人，到2020年以上人数将翻一番，这是一组可怕的数字。乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，近年来发病率稳定上升且趋年轻化，发病率在女性肿瘤中居第三位。据世界范围统计，全球每年约有120多万人患乳腺癌，每年死于乳癌人数20万，工业发达国家乳腺癌进一步增加，根据美国癌症协会(ACS)的报告，美国每年超过20万人接受乳癌治疗，其中约四万人被夺去生命。从2006中国乳腺癌内分泌治疗高峰论坛上了解到，中国是乳腺癌发病率增长最快的国家之一，我国每年有约20万名妇女患乳腺癌，中国乳腺癌发病率每年约增长3％；在京、津、沪等大中城市，乳腺癌已跃居女性恶性肿瘤之首。研究显示，乳腺癌发病与家族遗传有密切关系，特别是犹太人妇女有一种特殊的BRCA1基因变异与家族性乳癌密切相关，家族遗传导致的乳癌大约占所有病例的5％-10，有乳癌家族史同时有BRCA1基因变异的妇女，她们一生中有85％机率患乳癌，而且有50％的机率患妊巢癌。同时发现，BRCA1基因无变异的大部分妇女患乳癌，而各国此类乳癌的发病率都在升高。近来的研究发现一种叫ALDH1(乙醛脱氢酶1)，与乳癌的预后密切相关，它是乳癌复发的根源，可用于乳癌的预后的观察指标。ALDH1基因标记总体上具有高度一致，活化水平可能预测乳癌的存活率，并且是有前景的预后工具。美国密歇根州州立大学综合癌症中心的Ginestier等人，发现了一个检测乳腺癌干细胞的新标志物——乙醛脱氢酶1(ALDH1)。利用此标志物，研究者首次在乳腺癌实体组织中发现了干细胞，(Cell Stem Cell 2007，1：555)。干细胞在肿瘤细胞中的比例一般不到5％，但却可能是癌症演进的关键细胞。研究者采用一种称为ALDEFLUOR的试剂，检测细胞内的ALDH1活性。ALDH1活性高的细胞能被荧光标记，从而可以被检测和分选出来。结果表明，在乳腺组织的正常细胞以及癌细胞中，ALDEFLUOR阳性的细胞具有类似于干细胞的特性，而阴性细胞则不然。另外，对577份患者乳腺癌组织标本的研究显示，19％～30％的肿瘤表达ALDH1。表达ALDH1阳性肿瘤患者的预后最差，其总体生存率较低，发生转移的可能性是ALDH1阴性肿瘤患者的1.76倍。同时，研究者还对分选的细胞能否形成乳腺肿瘤进行了实验。结果显示，仅ALDH1阳性细胞可形成肿瘤，即使只用500个阳性细胞也会形成肿瘤；但5万个ALDH1阴性细胞也不会形成肿瘤。该研究发现一种重要的可应用于检测恶性乳腺癌干细胞的新标志物，用这种简单的标志物可评估患者预后。本发明采用核酸原位杂交技术检测ALDH1基因，观察细胞内ALDH1基因的表达程度，来分析癌症干细胞存在和存在的量，进一步研究表明ALDH1基因标记总体上具有高度一致，活化水平和高表达可能预测乳癌的预后，并且是有前景的预后工具。