[发明专利]一种TGFBI基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种TGFBI基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

肿瘤是指机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增生而形成的局部肿块。癌症病变的基本单位是癌细胞。人体细胞老化死亡后会有新生细胞取代它，以维持机体功能，人体绝大部分细胞都可以增生，但这种增生是有限度的，而癌细胞的增生则是无止境的，这使患者体内的营养物质被大量消耗。同时，癌细胞还能释放出多种毒素，使人体产生一系列症状，晚期时它转移到全身各处生长繁殖，最后导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热及脏器功能受损等，器官功能衰竭而死亡。癌症也叫恶性肿瘤，相对的有良性肿瘤。肿瘤是指机体在各种致瘤因素作用下，局部组织的细胞异常增生而形成的局部肿块。良性肿瘤容易清除干净，一般不转移、不复发，对器官、组织只有挤压和阻塞作用。但恶性肿瘤还可以破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，患者最终可能由于器官功能衰竭而死亡。

TGFBI基因具有抗肿瘤功能，它的表达降低会导致癌细胞增长，血管(肿瘤)生成以及促进癌细胞转移。TGFBI基因表达的TGFBI蛋白是一种由转化生长因子β诱导的分泌蛋白，在生物通早期的报道中发现该蛋白与癌症有关联，很可能成为癌症的一种生物学标记物。体外实验研究发现如果细胞缺失TGFBI会导致细胞过度增殖，促进肿瘤血管生成，促成癌症发生。因此说，TGFBI蛋白具有抗肿瘤的功能，但是，TGFBI蛋白如何在活体内发挥作用，其作用的分子机制如何一直鲜为人知。美国哥伦比亚大学放射学研究所、Herbert Irving综合癌症研究中心临床肿瘤系、洛克菲勒大学分子生物学实验室、中国医学科学院基础医学研究所生物化学与分子生物学系等处的研究人员在最新一期的《癌症研究》(Cancer Research)上发表关于TGFBI与癌症发生的相关文章。TGFBI基因表达的TGFBI蛋白是一种由转化生长因子β诱导的分泌蛋白，在早期的报道中发现该蛋白与癌症有关联，很可能成为癌症的一种生物学标记物。体外实验研究发现如果细胞缺失TGFBI会导致细胞过度增殖，促进肿瘤血管生成，促成癌症发生。因此说，TGFBI蛋白具有抗肿瘤的功能，但是，TGFBI蛋白如何在活体内发挥作用，其作用的分子机制如何一直鲜为人知。为了深入了解TGFBI蛋白的作用机制，研究小组开展了下面的研究工作。以小鼠为模型，将小鼠的TGFBI基因剔除掉，小鼠成为不表达TGFBI的缺陷型小鼠，结果表明，缺陷型小鼠更易罹患癌症，在7，12-二甲苯恩的作用下更易自发形成皮肤癌。研究者还发现，缺陷型的小鼠胚胎成纤维细胞更易发生染色体畸变，细胞增殖活性增强，细胞复制过程中过早进入S期(这些都有可能增强癌变的几率)。缺失TGFBI可能导致转录因子CREB激活，上调cyclin D1蛋白的表达。研究者发现，如果用遗传技术在小鼠的胚胎成纤维细胞中再导入TGFBI，可有效地逆转癌变的过程。研究小组的实验结果首次证实TGFBI在活体内具有肿瘤抑制的活性。研究也证实癌症患者血缘中TGFBI基因表达低，TGFBI基因可作为临床癌症的观测指标。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。本发明采用核酸原为杂交技术检测TGFBI基因的表达量来诊断临床各类癌症，有非常重要临床价值。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种TGFBI基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种TGFBI基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种TGFBI基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：